Summary
Proboscis resposta extensão ou PER é um ensaio de comportamento gosto que tem sido utilizado em moscas, bem como em abelhas. Quando a tromba faz contato com uma substância atrativa, a mosca estende sua tromba para consumir a substância. Soluções dos vários açúcares, são muito atraentes para a mosca.
Abstract
Proboscis resposta extensão (PER) é um ensaio de comportamento gosto que tem sido utilizado em moscas, bem como em abelhas.
Sobre a superfície da boca da mosca (labelo), existem cabelo-como estruturas chamadas sensilla que abriga neurônios gosto. Quando uma substância atraente faz contato com o labelo, a mosca estende sua tromba para consumir o material. Extensão Proboscis Response ensaio (PER) mede a resposta comportamento, gosto e é um método útil para aprender sobre as preferências alimentares em uma única mosca. Soluções dos vários açúcares, como sacarose, glicose e frutose, são muito atraentes para a mosca. O efeito de substâncias aversivo também pode ser testada como a redução do PER, quando misturado em uma solução doce.
Apesar da simplicidade do procedimento básico, existem muitas coisas que podem impedi-lo de trabalhar. Um dos fatores que requer atenção é o estado de resposta da mosca. O tempo necessário para trazer a fome a voar para o estado adequado de resposta varia drasticamente de 36 a 72 horas. Nós estabelecemos uma série de controles para avaliar o estado da mosca e que permite a triagem de não-responsivos ou hiper-sensíveis animais individuais. Outro fator importante é o nível de impacto ea posição do contato com o labelo, que seria difícil descrever com palavras. Esta apresentação em vídeo demonstra todos juntos estes com várias outras melhorias que poderiam aumentar a reprodutibilidade deste método.
Protocol
Fome
- Primeiro, morrer de fome a voar.
- Coloque um pequeno pedaço de Kim-wipe encharcada com água em um tubo vazio.
- Transferência de 20-30 bem alimentados voa para o frasco vazio.
- Verifique a cada 12 -24 horas para fazer se o papel está úmido.
- Fome a voar por 36-72 horas.
Fix the fly
- Tome uma mosca em um aspirador.
- Coloque uma ponta de 200 mL amarela sobre a abertura. Simultaneamente lançando e soprando sobre ele, você pode espremer a voar para a ponta amarela.
- Aplicar suavemente um pouco de ar para empurrar a voar até um ponto onde ele não pode se mover.
- Usando uma navalha, colocar uma marca de cerca de olho da mosca, em seguida, sugar a voar de volta e cortou a ponta.
- Suavemente soprar a voar de volta para a posição, mas apenas antes de chegar ao fim, faça um corte inclinado na posição em que a tromba vai ser localizado. Você pode fazer sem este corte viés, mas com certeza gostaria de fazer o seguinte processo mais fácil.
Prepare pavios sacarose
- Torça uma faixa de 6 mm de largura Kimwipes ® papel em um thread, e separe em pedaços pequenos de pavio cone-like forma (<1 cm).
- Essas mechas pequenas foram mergulhados em soluções de sacarose ou água e apresentado ao proboscis fazendo o contato.
Prepare os controles e animais experimentais
- Antes de testar qualquer tastants, dar uma solução de sacarose 4% para a mosca. Isto age como um controle positivo. Descartar qualquer mosca que não respondeu.
- Em seguida, teste dH 2 0 na mosca. Este ato como um controle negativo. Descartar a voar se o fez responder.
- Testar esses controles depois de testar o seu tastants.
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Discussion
Nesta apresentação, nós passamos por todas as etapas para Proboscis ensaio de resposta de extensão. O método parece muito simples, mas como em muitos ensaios outro comportamento, muitas coisas pequenas podem impedir que o ensaio de trabalhar. Nós já passamos por diversas etapas que necessitam de atenção especial. Aqui, eu enfatizar alguns dos fatores mais importantes.
Um desses fatores é a forma do pavio. Eu tenho mostrado alguns dos exemplos muito bons, mas é claro que, na realidade, tudo seria um espectro contínuo entre muito bom e muito ruim. No começo, você pode estar usando as coisas perto do lado muito bom, mas no dia-a-dia o seu padrão pode começar a mudar pouco a pouco para o intervalo não-tão-bons. Percepção humana dos chamados "bons" pode muito facilmente mudar de forma inconsciente. Uma maneira de evitar isso é para tirar uma foto da torcida você usou em suas experiências, e comparar todas as imagens lado a lado. Ou, pelo menos, ter um retrato do pavios que funcionou muito bem, e olhar para ele por um tempo antes de testar PERs.
Outra coisa importante é o nível de impacto do contato. Isto é mais fácil de lidar, porque o objetivo é fazer com que o contato o mais suave possível. Se você não vê mover a voar de cabeça em tudo, que é o melhor.
A condição de fome é a mais difícil fator de controlar. No gosto muitos ou olfativas ensaios comportamentais, uma época de fome de 24 horas é usado com muita freqüência. 24 horas pode ser muito conveniente para as pessoas fazerem a experiência, mas se você trás o seu moscas em uma condição muito boa, este é um período bastante curto. Mas mesmo se você usou um alimento rico voar e controlar a densidade precisamente, a janela para testar PER pode variar de 36 horas para 72 horas. Então, como uma experiência, eu tenho que dizer que é muito inconveniente para as pessoas. Há um outro fator que torna mais difícil para os experimentadores. Por uma questão de fato, haveria muitos lotes, onde a janela para o experimento pode ser muito curto, ou pode mesmo não existir.
Então, existem alguns obstáculos importantes que você tem que passar, mas a coisa mais importante é o controlo positivo e negativo que eu mencionei. Mantendo-se os padrões de forma muito rigorosa, você será capaz de coletar conjuntos de dados confiáveis.
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Acknowledgments
Agradecemos a Paul Graham para servir como um homem da câmera na apresentação de vídeo.
Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| HDR-HC1 | Camera | Sony Corporation | ||
| SMZ800 | Microscope | Nikon Instruments | ||
| P-IBSS | Camera Adapter | Nikon Instruments | ||
| 1x DC10LN | Camera Adapter | Optem, Qioptiq Inc. | ||
| 257010 | Camera Adapter | Optem, Qioptiq Inc. | ||
| TREKKER Mk2 | Tripod | BENBO | ||
| Gorillapod SLR | Tripod | Joby | ||
| iMac G5 | Computer | Apple | ||
| Power Mac G5 | Computer | Apple | ||
| iMovie | Software | Apple | ||
| MPEG Streamclip | Software | SQUARED 5 |
References
- Dethier, V. G. The Hungry Fly. , Harvard University Press. Cambridge. (1976).
