Флэш Замораживание и Cryosectioning E12.5 мозга мыши

Summary

Продемонстрированный в этом видео-методы для флеш-замораживания и секционирования эмбриональной ткани мозга от мыши. Полезные советы по использованию криостат даны, в том числе способы устранения неполадок, которые могут использоваться при резке, чтобы результирующая разделах ткани без трещин и других искажений.

Protocol

1. Fix ткани в 4% параформальдегида в ФСБ на необходимое время.
2. Сахароза влить ткани (криозащиты)
   1. Сделать 30% раствор сахарозы в ФБР м / о в 2059 трубке.
   2. Промойте ткань в 3 раза PBS (~ 5 мин с качалки).
   3. Место ткани в 30% раствором сахарозы. Ткань не утонет.
   4. Место ткани в 4 ° С в течение ночи, или пока он не затонул.
3. Этикетка соответствующего размера cryomold информацию и ориентацию.
4. Заполните cryomold с октября (во избежание пузырей).
5. Передача ткани октября ванной и пальто с октября
6. Передача ткани октября в cryomold.
7. Восток ткани под микроскопом.
8. Залить жидким азотом в пластиковые чашки Петри.
9. Быстро и осторожно опустите ткань в cryomold в азоте. (Не погружать начало cryomold.)
10. При октября твердая белая, место замороженные ткани в -80 ° C морозильника для хранения.
11. Равновесие ткани до ~ 20 ° C в течение 30 мин. до секционирования.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Tissue-Tek Cryomold	Ted Pella, Inc.	27181
O.C.T.	Ted Pella, Inc.	27050
Sucrose solution			30% sucrose solution in PBS w/v
paraformaldehyde			4% paraformaldehyde in PBS