플래시 동결 E12.5 마우스 브레인 Cryosectioning

Summary

플래시 마우스 배아 뇌 조직을 동결 sectioning위한 방법은 다음과 같습니다이 비디오에서 보여주었다. 그라 이오 스탯를 사용하기위한 유용한 팁을은 결과 조직의 섹션 균열 및 기타 왜곡 무료로되는 것을 보장하기 위해 절단하는 동안 사용할 수있는 문제 해결 방법을 포함하여 제공됩니다.

Protocol

1. 원하는 시간을 PBS에 4 % paraformaldehyde에 조직을 수정.
2. 자당 달이다 조직 (cryoprotection)
   1. 2,059 튜브 PBS W / V에서 30 % 자당 솔루션을 확인하십시오.
   2. PBS에서 조직 배 린스 (락을 함께 ~ 5 분).
   3. 30 % 자당 용액에 넣어 조직. 조직은 침몰하지 않습니다.
   4. 그것이 침몰했다 ° C 야간, 또는 때까지 4 조직을 놓으십시오.
3. 라벨 적절한 크기는 정보와 오리 엔테이션과 함께 cryomold.
4. (거품을 방지) OCT와 cryomold를 입력합니다.
5. OCT 목욕 및 OCT로 코팅을하는 조직을 전송
6. cryomold에서 OCT하기 위해 조직을 전송합니다.
7. 현미경 동양의 조직.
8. 플라스틱 페트리 접시에 액체 질소를 부어.
9. 신속하고 조심스럽게 질소로 cryomold의 조직을 낮추십시오. (잠수함 cryomold의 상단을하지 않습니다.)
10. OCT는 흰색 고체 경우 -80 ° C 저장 냉동실에 냉동 조직을 놓으십시오.
11. ~ 20 ° C 이상에서 30 분 조직을 평형. 이전 sectioning 수 있습니다.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Tissue-Tek Cryomold	Ted Pella, Inc.	27181
O.C.T.	Ted Pella, Inc.	27050
Sucrose solution			30% sucrose solution in PBS w/v
paraformaldehyde			4% paraformaldehyde in PBS