Flaş Dondurma ve E12.5 Fare Beyin Cryosectioning

Summary

Bu video flaş fare embriyonik beyin dokusu dondurma ve kesit alma teknikleri vardır gösterdi. Ortaya çıkan doku bölümleri çatlak ve diğer çarpıtmalar olduğundan emin olmak için kesim sırasında kullanılabilir sorun giderme yöntemleri de dahil olmak üzere, Kriyostat kullanmak için yararlı ipuçları verilmiştir.

Protocol

1. Istenilen zaman için PBS içinde% 4 paraformaldehid doku sabitleyin.
2. Sakkaroz demlenmeye doku (cryoprotection)
   1. 2059 tüp PBS w / v% 30 sakaroz çözeltisini olun.
   2. PBS içinde doku 3x sallanan ile durulayın (~ 5 dk).
   3. % 30 sukroz solüsyonu yerleştirin doku. Doku lavabo olmaz.
   4. Batırdı, 4 ° C gecede kadar veya doku yerleştirin.
3. Etiket uygun boyutu, bilgi ve yönlendirme ile cryomold.
4. (Baloncuklar önlemek) OCT ile cryomold doldurun.
5. Ekim banyo ve OCT ile kat doku transferi
6. Cryomold OCT doku aktarın.
7. Orient mikroskop altında doku.
8. Plastik Petri kabı içine sıvı nitrojen dökün.
9. Hızlı ve dikkatli bir şekilde azot içine cryomold doku düşüktür. (Üst cryomold daldırın.)
10. OCT beyaz katı olduğunda, -80 ° C derin dondurucu saklama için dondurulmuş doku içine yerleştirin.
11. ~ 20 ° C arası en az 30 dakika süreyle doku dengelenmesi. önce kesit.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Tissue-Tek Cryomold	Ted Pella, Inc.	27181
O.C.T.	Ted Pella, Inc.	27050
Sucrose solution			30% sucrose solution in PBS w/v
paraformaldehyde			4% paraformaldehyde in PBS