Summary
Это видео демонстрирует модели ортотопической трансплантации аортального как простая модель для изучения развития трансплантации васкулопатии (TVP) у крыс.
Abstract
Исследование модели хронического отторжения имеют важное значение для расследования патобиологические и патофизиологических процессов при развитии трансплантации васкулопатии (TVP).
Обычно используется животной модели развития сердечно-сосудистых исследований хронического отторжения гетеротопической модель трансплантации сердца прошла в лабораторных грызунов. Эта модель широко используется в экспериментах с Оно и Линдси (3) опубликовал свою технику. Для анализа результатов в кровеносных сосудах, сердце должно быть секционного и все суда должны быть измерены.
Другой метод для исследования хронического отторжения при сердечно-сосудистых опросов является пересадка аортального модели (1, 2). В модели ортотопической трансплантации аорты, аорта может быть легко гистологически оценивается (2). PVG к ACI модель особенно полезна для CAV исследования, так как острой сосудистой отказ не основной сбивающий фактор и Циклоспорин (CSA) лечение не предотвращает развитие CAV, подобное тому, что мы находим в клинических условиях (4 ). A7-дневный период CsA требуется в этой модели для предотвращения острого отторжения и добиться выживания в долгосрочной перспективе с развитием TVP.
Эта модель также может быть использован для исследования острого отторжения и сотовые средства массовой информации некроза в ксеногенных моделей (5).
Protocol
Крысы весом около 250-300г закупаются у Charles River (Sandhofer Weg 7, Д-97633 Sulzfeld).
Трансплантация выполняются с помощью PVG крыс в качестве доноров, и ACI крыс в качестве получателей.
Крысы размещаются в обычных условиях, кормили стандартной крыс кормом и водой объявление libidum.
Все хирургические инструменты стерилизуются перед использованием.
Донор подготовки:
Обезболить крысы с изофлуран (2,5-3%) с помощью индукции камеры.
- Бритье брюшной и грудной волосы и место крысу на спину и положите маску на нос и рот, чтобы не отставать анестезии.
- Лечить брюшной и грудной области широко используя Прово-йод, следующего использования 80% этанола, повторите этот шаг в три раза.
- Проверить рефлексы щипать задние ноги, чтобы быть уверенным, что крысы достаточно anesthesized.
- Обескровить крысы, открыв живот и резки отверстий в брюшной аорты.
- Аккуратно откройте грудной клетки, чтобы найти нисходящей грудной аорты.
- Рассеките грудной аорты от окружающих тканей, как жир, нервы и пищевода.
- Вывод 1,5 см кусок аорты использованием couter, без повреждения ткани аорты.
- Заливать аорты трансплантат полностью с холодным стерильным физиологическим раствором и хранят трансплантата при 4 ° C.
Получатель:
Обезболить крысы с изофлуран (2,5-3%) с помощью индукции камеры. Температура тела сохраняется во время хирургической операции.
- Бритье области живота и применять глазную мазь, чтобы предотвратить глаз от высыхания во время анестезии.
- Место крысу на спину и положите маску на нос и рот, чтобы не отставать анестезии.
- Лечить брюшной области с помощью Прово-йод, следующего использования 80% этанола, повторите этот шаг в три раза.
- Проверить рефлексы щипать задние ноги, чтобы быть уверенным, что крысы достаточно anesthesized.
- Выполните средней линии разреза брюшной полости разделения кожи и мышц в два этапа, чтобы открыть живот.
- Место в кишечнике нагревается солевой увлажненной неопудренные перчатки. Сложите перчатка вокруг кишечника, чтобы предотвратить потерю влаги.
- Удалить жировой ткани, покрывающей брюшную аорту.
- Рассеките аорты форме инфраренального региона к развилке, осторожны, чтобы не причинить ущерб отрасли судов.
- При необходимости перевязывать ветви аорты.
- Первое использование микрохирургической зажим на инфраренального части расчлененного аорты, чтобы остановить поток крови.
- Далее, поместите второй зажим вблизи бифуркации аорты.
- Теперь, когда поток крови останавливается, удалите короткий сегмент аорты.
- Возьмите трансплантата донором аорты, которая хранится в 0,9% стерильного физиологического раствора на льду, сократите ее до надлежащей длины и поместите его в зазоре.
- Подключите доноров аорты получателю аорты, выполняя работы швы использованием 8-0 проленовой шва (Ethicon, Нордерштедт, Германия). Начните с черепно из конца в конец анастомоза.
- Когда дистального конца в конец анастомоза закончен, осторожно откройте дистальных зажимом.
- При отсутствии кровотечения после открытия дистальных зажим, осторожно откройте черепных зажимом. В случае кровотечения в швы, рядом зажим снова, найдите кровотечения и остановить кровотечение, используя одну стежка.
- Там должно быть видимым импульса на дистального конца аорты.
- Следующий шаг назад кишечника в брюшную полость.
- Флеш живота с нагретого стерильного физиологического раствора.
- Закрыть мышечного слоя брюшной стенки использованием 6-0 проленовой работает швов (Ethicon, Нордерштедт, Германия).
- Используйте 5-0 проленовой (Ethicon, Нордерштедт, Германия), работающих швы, чтобы закрыть кожи.
- Хотя крысы все еще находится в анестезии, вводят 4-5mg/kg Carprofen подкожно.
- Для обеспечения достаточного обезболивания для этого типа процедуры, метамизол добавляется к питьевой воде (50 мг на 100 мл Метамизол) болеутоляющее средство в течение 3 дней после трансплантации.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
По ряду причин мы нашли модель ортотопической трансплантации аорты более точный способ исследовать развитие TVP по сравнению с моделью гетеротопической трансплантации сердца:
Что касается хирургической техники, аорты модель трансплантации воплощает легко осуществимый метод, требующий исключительно достижением конца в конец-анастомоза, в то время как модель гетеротопической пересадке сердца можно считать более сложной и подверженной ошибкам вызов навыков хирурга с , требуя конца в сторону анастомоза на двух основных сосудов.
Анализ и оценка гистологических препаратов резко способствовало с пересадкой васкулопатии могут быть рассмотрены в одном судне единственным определена диаметром вместо изучения множества мелких сосудов сердца показывает огромное разнообразие в размерах и конституции, которая могла гандикап следователю в получении объективной и надежных результатов. Грудной аорты реципиента могут служить в качестве нормального контроля, предлагая простой и надежный объект сравнения в диаметре и морфологические внешний вид, в то время как в модели гетеротопической трансплантации сердца трудно сравнить пери-или инфаркт суда, лежащие в основе большой вариабельность.
В дополнение к этим результатам, аортальный аллотрансплантатов не столь склонны к разрушительным гистологические изменения, которые могут возникнуть в результате применяемых хирургических процедур. Фиброз или инфаркты могут произойти в и, возможно, влияют на ткани гетеротопической пересадке сердца и встроенные сосуды, делает их непригодными для оценки.
Благодаря своим размерам и конституции, аорта идеальный объект для простого и точного исследования морфологических, биохимических и молекулярно реконструкции в каждом из трех слоев сосудистой стенки, такие как степень концентрических утолщение интимы, некроз миоцитов СМИ или повышение синтеза цитокинов и факторов роста.
Иммунного ответа, порожденных аортального аллотрансплантата на самом деле достаточно, чтобы вызвать хронические изменения в пересадке, но не нашла достаточных, чтобы вызвать острые эпизоды отказа (2). Благодаря этой промежуточной иммуногенность трансплантата, ни пересадка проиграл острого отторжения, а не начальное иммуносупрессивной лечения ЦсА не требуется. Таким образом, модель позволяет исследовать начальные эффекты наркотиков на хронические заболевания сосудов трансплантата без влияния или фальсификация путем профилактического иммунитета часто видели в гетеротопической пересадке сердца (2, 4).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Нет конфликта интересов объявлены.
Acknowledgments
Авторы благодарят Кристиана Pahrmann ее гистологических работ.
Финансирование
Соня Schrepfer получил грант от Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) (SCHR992 / 3 1 и SCHR992/4-1).]
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Surgical microscope (magnification 25x) | |||
| Isoflurane | |||
| shaver | |||
| Provo-Iodine | |||
| ice cold 0.9% saline | |||
| prewarmed 0.9% sterile saleine | |||
| eye ointment | |||
| glove | |||
| microsurgical scissirs | |||
| forceps | |||
| clamps | |||
| 8-0 suture (prolene) | |||
| 6-0 suture (prolene) | |||
| 5-0 suture (prolene) | |||
| Carprofen | |||
| Metamizol | |||
| Q-tips |
References
- Deuse, T., Hoyt, G., Koyanagi, T., Robbins, R. C., Schrepfer, S. Prevention and Inhibition But Not Reversion of Chronic Allograft Vasculopathy by FK778. Transplantation. 85, 870-877 (2008).
- Mennander, A., Tiisala, S., Halttunen, J., Yilmaz, S., Paavonen, T., Hayry, P. Chronic rejection in rat allografts. An experimental model for transplant arteriosclerosis. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 11, 671-680 (1991).
- Ono, K., Lindsey, E. S. Improved technique of heart transplantation in rats. J Thorac Cardiovasc Surg. 57, 225-225 (1969).
- Poston, R. S., Billingham, M., Hoyt, E. G. Rapamycin reverses chronic graft vascular disease in a novel cardiac allograft model. Circulation. 100, 67-100 (1999).
- Schrepfer, S., Deuse, T., Koch-Nolte, F., Krieger, T., Haddad, M., Schäfer, H., Pelletier, M. P., Robbins, R. C., Reichenspurner, H. FK778 in Experimental Xenotransplantation: A Detailed Analysis of Drug Efficacy. J Heart Lung Transplant. 26, 70-77 (2007).
