Summary
וידאו זה מדגים את מודל orthotopic השתלת מסתם אאורטלי כמודל פשוט ללמוד את הפיתוח של vasculopathy ההשתלה (TVP) בחולדות.
Abstract
מודלים המחקר של דחייה כרונית הם חיוניים כדי לחקור תהליכים pathobiological ו pathophysiological במהלך הפיתוח של vasculopathy ההשתלה (TVP).
המודל החי נפוץ לב וכלי דם מחקרים דחייה כרונית הוא הלב heterotopic השתלת המודל שבוצעו מכרסמים במעבדה. מודל זה נמצא בשימוש נרחב מאז הניסויים אונו לינדסי (3) פרסם את הטכניקה שלהם. כדי לנתח את הממצאים כלי הדם, הלב צריך להיות מחולק וכלי הכל צריך להימדד.
שיטה נוספת לחקור דחייה כרונית של הלב וכלי הדם התהיות המודל השתלת מסתם אאורטלי (1, 2). בשנת המודל אבי העורקים orthotopic ההשתלה, האאורטה יכול בקלות להיות מוערכת בהיסטולוגיה (2). המודל PVG-to-ACI שימושית במיוחד עבור CAV מחקרים, שכן דחייה חריפה של כלי הדם אינו גורם בלבול גדול וטיפול ציקלוספורין A (CSA) אינה מונעת את הפיתוח של CAV, בדומה למה שאנו מוצאים הגדרה קלינית (4 ). A7 יום בתקופה של CSA נדרש במודל זה כדי למנוע דחייה חריפה להשיג ההישרדות לטווח ארוך עם התפתחות TVP.
מודל זה יכול לשמש גם כדי לחקור דחייה תאית אקוטית נמק התקשורת מודלים xenogeneic (5).
Protocol
חולדות שוקל כ 250-300 גרם נרכשים מ צ'ארלס ריבר (Sandhofer מאייתים 7, D-97633 Sulzfeld).
השתלות מתבצעות באמצעות חולדות PVG כמו תורמים, וחולדות ACI כמקבל.
חולדות הם שוכנו בתנאים רגילים, נמאס תקן עכברוש ושולחת libidum מים המודעה.
כל המכשירים כירורגית הם מעוקרים לפני השימוש.
התורם הכנה:
הרדימי עכברוש עם isoflurane (2,5-3%) באמצעות תא אינדוקציה.
- לגלח את שיער הבטן ובית החזה מקום חולדה על הגב שלה במקום facemask על האף והפה שלה כדי לשמור על הרדמה.
- לחטא את אזור הבטן החזה נרחב באמצעות Provo-יוד, השתמש הבא אתנול 80%, לחזור על פעולה זו שלוש פעמים.
- בדוק רפלקסים צובט את הרגליים האחוריות כדי להיות בטוח כי הוא עכברוש anesthesized מספיק.
- ולגרום לדימום מחודש את העכברוש על ידי פתיחת הבטן חיתוך חור לתוך אבי העורקים בבטן.
- בזהירות לפתוח את בית החזה כדי למצוא את אבי העורקים החזי יורד.
- מנתחים את אבי העורקים החזי מן הרקמות הסובבות כמו, עצבים שומן הוושט.
- משיכה חתיכת 1.5cm של אבי העורקים באמצעות couter, ללא נזק לרקמות של האאורטה.
- Perfuse השתל אבי העורקים ביסודיות עם תמיסת מלח סטרילית קר לאחסן את השתל ב 4 ° C.
הנמען:
הרדימי עכברוש עם isoflurane (2,5-3%) באמצעות תא אינדוקציה. טמפרטורת הגוף נשמרת במהלך ההליך הכירורגי.
- גילוח באזור הבטן להחיל משחה העין כדי למנוע את העיניים מהתייבשות במהלך ההרדמה.
- מניחים את חולדה על הגב שלה במקום facemask על האף והפה שלה כדי לשמור על הרדמה.
- לחטא את אזור הבטן באמצעות Provo-יוד, השתמש הבא אתנול 80%, לחזור על פעולה זו שלוש פעמים.
- בדוק רפלקסים צובט את הרגליים האחוריות כדי להיות בטוח כי הוא עכברוש anesthesized מספיק.
- ביצוע חתך בבטן קו האמצע המפריד בין העור והשרירים בשני שלבים כדי לפתוח את הבטן.
- מניחים את המעיים כפפה אבקת מלח חימם לחות ללא תשלום. מקפלים את הכפפה סביב המעיים כדי למנוע אובדן לחות.
- הסר את רקמת שומן המכסה את אבי העורקים בבטן.
- לנתח האאורטה בצורת באזור infrarenal אל הסתעפות, נזהר שלא לגרום נזק על ענפי הכלים.
- אם הענפים ולקשור הכרחי של האאורטה.
- ראשית להשתמש מהדק microsurgical מצד infrarenal של האאורטה גזור כדי לעצור את זרימת הדם.
- בשלב הבא, במקום לצבוט שני אחרי הסתעפות של האאורטה.
- עכשיו את זרימת הדם נעצרת, להסיר קטע קצר של האאורטה.
- קח את אבי העורקים תורם השתל, כי כבר שמרו מלוחים סטרילית 0,9% על הקרח, לקצר אותו לאורך הולם ומקם אותה בפער.
- חבר את אבי העורקים אל אבי העורקים התורם למקבל, ביצוע תפרים פועל באמצעות 8-0 prolene תפר (Ethicon, Norderstedt, גרמניה). התחל עם השקה הקצה לקצה הגולגולת.
- כאשר השקה דיסטלי end-to-end הוא סיים, בזהירות לפתוח את מהדק דיסטלי.
- כאשר יש דימום לא לאחר פתיחת מלחציים דיסטלי, בזהירות לפתוח את מהדק גולגולתי. במקרה של דימום התפרים, לסגור את מהדק שוב, לאתר את הדימום לעצור את הדימום באמצעות אחד תפר אחד.
- צריך להיות גלוי הדופק בסוף הדיסטלי של האאורטה.
- הבא להעביר את המעיים בחזרה לתוך הבטן.
- רוקן את הבטן עם מי מלח סטרילית prewarmed.
- סגור את שכבת השרירים של דופן הבטן באמצעות תפרים ריצה 6-0 prolene (Ethicon, Norderstedt, גרמניה).
- השתמש 5-0 prolene (Ethicon, Norderstedt, גרמניה) פועל תפרים כדי לסגור את העור.
- בעוד העכברוש עדיין הרדמה, להזריק 4-5mg/kg Carprofen תת עורי.
- כדי לספק שיכוך כאבים מספיק עבור סוג זה של ההליך, metamizol מתווסף מי השתייה (50 מ"ג לכל 100 מ"ל Metamizol) עבור משככי כאבים להשתלה 3 ימים הודעה.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
מכמה סיבות מצאנו את המודל orthotopic השתלת מסתם אאורטלי דרך מדויקת יותר לחקור את הפיתוח של TVP לעומת המודל heterotopic השתלת לב:
לגבי טכניקה כירורגית, המודל השתלת מסתם אאורטלי מגלם שיטה אפשרית בקלות, המחייב אך ורק את ההישג של end-to-end-השקה, ואילו המודל heterotopic השתלת לב עשוי להיחשב אתגר יותר מורכב מועדת לטעויות על הכישורים של מנתח , המחייב end-to-הצד השקה על שני כלי מרכזי.
ניתוח ומדידה של דגימות היסטולוגית הוא הקל באופן דרסטי מאז vasculopathy ההשתלה יכול להיבחן בכלי אחד בקוטר מוגדר היחיד במקום חקירה של מספר רב של כלי לב קטן המציג מגוון רחב בגודל חוקה אשר יכול לנכים החוקר בהשגת אובייקטיבי מהימנות התוצאות. אבי העורקים החזי של הנמען יכול לשמש מלאה נורמלי, המציע אובייקט קל ואמין השוואה בקוטר מראה מורפולוגי, בעוד המודל heterotopic השתלת לב קשה להשוות בין כלי פרי או שריר הלב הבסיסי השתנות interindividual גדול.
בנוסף ממצאים אלה, allografts אבי העורקים אינם נוטים כמו לשינויים היסטולוגית משבש שעלולים לנבוע ניתוחים מיושם. פיברוזיס או אוטם עלולה להתרחש ואולי אף להשפיע על הלב heterotopic השתלת רקמות וכלי מוטבע, טיוח אותם ראויים להערכה.
בשל גודלו חוקה, אבי העורקים הוא נושא אידיאלי חקירה פשוטה המדויק של שיפוץ מורפולוגיים, ביוכימיים מולקולרי בתוך כל אחד של שלוש שכבות של קיר כלי הדם, כגון מידת עיבוי intimal קונצנטריים, נמק myocyte ב התקשורת או סינתזה מוגברת של ציטוקינים וגורמי גדילה.
התגובה החיסונית שנוצר על ידי allograft אבי העורקים הוא אכן מספיק כדי לעורר שינויים כרוניים ההשתלה, אך נמצא לא מספיק כדי לגרום פרקים דחייה חריפה (2). הודות immunogenicity ביניים זה של השתל, השתלת לא הולך לאיבוד לדחייה חריפה ללא טיפול לדיכוי חיסוני ראשוני עם CSA נדרשת. המודל ובכך מאפשר לחקור את ההשפעות הראשוניות של תרופות על vasculopathy allograft כרונית מבלי להשפיע על מהילה או על ידי דיכוי חיסוני מניעתי לעיתים לראות השתלות לב heterotopic (2, 4).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
אין ניגודי אינטרסים הכריז.
Acknowledgments
המחברים מודים כריסטיאן Pahrmann לעבודה היסטולוגית שלה.
מימון
סוניה Schrepfer קיבל מענק מחקר של דויטשה Forschungsgemeinschaft (DFG) (SCHR992 / 3 1 ו SCHR992/4-1).]
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Surgical microscope (magnification 25x) | |||
| Isoflurane | |||
| shaver | |||
| Provo-Iodine | |||
| ice cold 0.9% saline | |||
| prewarmed 0.9% sterile saleine | |||
| eye ointment | |||
| glove | |||
| microsurgical scissirs | |||
| forceps | |||
| clamps | |||
| 8-0 suture (prolene) | |||
| 6-0 suture (prolene) | |||
| 5-0 suture (prolene) | |||
| Carprofen | |||
| Metamizol | |||
| Q-tips |
References
- Deuse, T., Hoyt, G., Koyanagi, T., Robbins, R. C., Schrepfer, S. Prevention and Inhibition But Not Reversion of Chronic Allograft Vasculopathy by FK778. Transplantation. 85, 870-877 (2008).
- Mennander, A., Tiisala, S., Halttunen, J., Yilmaz, S., Paavonen, T., Hayry, P. Chronic rejection in rat allografts. An experimental model for transplant arteriosclerosis. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 11, 671-680 (1991).
- Ono, K., Lindsey, E. S. Improved technique of heart transplantation in rats. J Thorac Cardiovasc Surg. 57, 225-225 (1969).
- Poston, R. S., Billingham, M., Hoyt, E. G. Rapamycin reverses chronic graft vascular disease in a novel cardiac allograft model. Circulation. 100, 67-100 (1999).
- Schrepfer, S., Deuse, T., Koch-Nolte, F., Krieger, T., Haddad, M., Schäfer, H., Pelletier, M. P., Robbins, R. C., Reichenspurner, H. FK778 in Experimental Xenotransplantation: A Detailed Analysis of Drug Efficacy. J Heart Lung Transplant. 26, 70-77 (2007).
