Summary
Este video muestra el modelo de trasplante ortotópico de la aorta como un modelo simple para estudiar el desarrollo de vasculopatía del trasplante (TVP) en ratas.
Abstract
Modelos de investigación de rechazo crónico son esenciales para investigar los procesos fisiopatológicos patobiológicas y durante el desarrollo de vasculopatía del trasplante (TVP).
El modelo animal utilizado para estudios cardiovasculares rechazo crónico es el modelo de trasplante de corazón heterotópico realizado en roedores de laboratorio. Este modelo se utiliza ampliamente en los experimentos ya que Ono y Lindsey (3) publica su técnica. Para analizar los resultados en los vasos sanguíneos, el corazón tiene que ser seccionado y todos los buques tienen que ser medidos.
Otro método para investigar el rechazo crónico en cuestionamientos cardiovascular es el modelo de trasplante de aorta (1, 2). En el modelo de trasplante ortotópico de la aorta, la aorta puede ser fácilmente evaluados histológicamente (2). El modelo de PVG a ACI es especialmente útil para los estudios de CAV, ya que el rechazo vascular agudo no es un factor de confusión importante y tratamiento de ciclosporina A (CsA) no impide el desarrollo de la CAV, similar a lo que encontramos en la práctica clínica (4 ). A7 días del período de CsA se requiere en este modelo para prevenir el rechazo agudo y de lograr supervivencia a largo plazo con el desarrollo de TVP.
Este modelo también se puede utilizar para investigar el rechazo agudo celular y necrosis en los medios de comunicación modelos xenogénicos (5).
Protocol
Las ratas con un peso aproximado de 250 300 g son adquiridos de Charles River (Sandhofer Weg 7, D-97633 Sulzfeld).
Los trasplantes se realizaron con ratas PVG como donantes, y las ratas ACI como receptores.
Las ratas son alojados en condiciones convencionales, alimentados estándar de comida de rata y libidum agua ad.
Todos los instrumentos quirúrgicos son esterilizados antes de su uso.
Preparación de los donantes:
Anestesiar la rata con isoflurano (2,5-3%), utilizando una cámara de inducción.
- Afeitar el vello abdominal y torácica y el lugar de la rata en la espalda y colocar una máscara sobre su nariz y la boca para mantener la anestesia.
- Desinfectar el área abdominal y torácica ampliamente mediante Provo-yodo, el próximo uso etanol al 80%, repetir este paso tres veces.
- Revisar los reflejos pellizcar las patas traseras para asegurarse de que la rata es suficiente anestesiado.
- Exsanguinate la rata abriendo el abdomen y haciendo un agujero en la aorta abdominal.
- Abra cuidadosamente el tórax para encontrar la aorta torácica descendente.
- Disecar la aorta torácica de los tejidos circundantes como nervios de grasa, y el esófago.
- Retirar una pieza de 1,5 cm de la aorta con un couter, sin dañar el tejido de la aorta.
- Perfusión del injerto aórtico a fondo con solución salina estéril fría y guardar el injerto a 4 ° C.
Destinatario:
Anestesiar la rata con isoflurano (2,5-3%), utilizando una cámara de inducción. La temperatura corporal se mantiene durante el procedimiento quirúrgico.
- Afeitarse la zona abdominal y aplicar ungüento oftálmico para evitar que los ojos se sequen durante la anestesia.
- Coloque el ratón sobre la espalda y colocar una máscara sobre su nariz y la boca para mantener la anestesia.
- Desinfectar el área abdominal con Provo-yodo, el próximo uso etanol al 80%, repetir este paso tres veces.
- Revisar los reflejos pellizcar las patas traseras para asegurarse de que la rata es suficiente anestesiado.
- Realizar una incisión abdominal que separa la piel y el músculo en dos pasos para abrir el abdomen.
- Lugar de los intestinos en una solución salina caliente guante sin polvo hidratada. Veces el guante de todo el intestino para evitar la pérdida de humedad.
- Eliminar el tejido graso que cubre la aorta abdominal.
- Disecar la aorta infrarrenal forman la región de la bifurcación, cuidado de no causar daños en las ramas de los vasos.
- Si es necesario ligar las ramas de la aorta.
- En primer lugar utilizar una pinza de microcirugía en la parte infrarrenal de la aorta disecada para detener el flujo de sangre.
- Después, coloque una segunda abrazadera cerca de la bifurcación de la aorta.
- Ahora que el flujo de sangre se detiene, cortar un segmento corto de la aorta.
- Tomar el injerto aórtico de los donantes, que se ha mantenido en el 0,9% de solución salina estéril en el hielo, acortar a la longitud adecuada y la posición en la brecha.
- Conectar la aorta de los donantes a la aorta receptor, realizar sutura continua con prolene 8-0 sutura (Ethicon, Norderstedt, Alemania). Comience con el cráneo de extremo a extremo anastomosis.
- Cuando la porción distal de extremo a extremo anastomosis está terminado, abra la pinza distal.
- Cuando no hay sangrado después de la apertura de la pinza distal, abra la pinza del cráneo. En caso de sangrado en los puntos de sutura, cierre la pinza de nuevo, busque la hemorragia y detener la hemorragia con una sola puntada.
- Debe haber un impulso visible en el extremo distal de la aorta.
- Luego mueva el intestino en el abdomen.
- Enjuague bien el abdomen con solución salina estéril precalentada.
- Cerca de la capa muscular de la pared abdominal usando suturas de prolene 6-0 en ejecución (Ethicon, Norderstedt, Alemania).
- Use 5-0 prolene (Ethicon, Norderstedt, Alemania) que se ejecuta suturas para cerrar la piel.
- Mientras que la rata aún está en la anestesia, se inyecta por vía subcutánea 4-5mg/kg Carprofen.
- Para proporcionar una analgesia suficiente para este tipo de procedimiento, el metamizol se añade al agua potable (50 mg Metamizol por cada 100 ml) para medicamentos para el dolor durante 3 días después del trasplante.
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Discussion
Por varias razones hemos encontrado el modelo de la aorta trasplante ortotópico de una manera más precisa para investigar el desarrollo de TVP en comparación con el modelo de trasplante de corazón heterotópico:
En cuanto a la técnica quirúrgica, el modelo de trasplante de aorta representa un método fácil de lo posible, que requiere únicamente la realización de extremo a extremo anastomosis, mientras que el modelo de trasplante de corazón heterotópico puede ser considerado como un desafío más complejo y propenso a errores a la habilidad del cirujano s , lo que requiere de extremo a anastomosis en dos grandes vasos.
Análisis y medición de muestras histológicas se reduce drásticamente ya que facilitó la vasculopatía del trasplante puede ser examinado en un solo vaso de un diámetro único definido en lugar de la exploración de numerosos pequeños vasos cardíacos que muestran una gran variedad de tamaño y constitución, que podría desventaja del investigador en la obtención de objetivos y resultados creíbles. La aorta torácica del receptor puede servir como un control normal, que ofrece un objeto fácil y fiable de comparación de diámetro y aspecto morfológico, mientras que en el modelo de trasplante de corazón heterotópico es difícil comparar los vasos peri-o infarto de miocardio subyacente a una gran variabilidad interindividual.
Además de estos hallazgos, los aloinjertos aórtica no son tan propensos a las alteraciones histológicas perjudicial que puede resultar de los procedimientos aplicados quirúrgica. Fibrosis o infartos pueden ocurrir en los tejidos y pueden afectar a heterotópico trasplante de corazón y los vasos incrustados, lo que hace que los hace inadecuados para su evaluación.
Debido a su tamaño y constitución, la aorta es un tema ideal para la investigación sencilla y exacta de remodelación morfológica, bioquímica y molecular de cada una de las tres capas de la pared vascular, tales como el grado de engrosamiento de la íntima concéntricos, necrosis de miocitos en el los medios de comunicación o aumento de la síntesis de citocinas y factores de crecimiento.
La respuesta inmune generada por un injerto aórtico es de hecho suficiente para provocar alteraciones crónicas en el trasplante, pero fue considerado insuficiente para inducir episodios de rechazo agudo (2). Gracias a esta inmunogenicidad intermedio del injerto, el trasplante no se pierde en el rechazo agudo y el tratamiento inicial no inmunosupresores con CsA es necesario. El modelo de lo que permite investigar los efectos iniciales de las drogas en la vasculopatía crónica del injerto, sin la influencia o la adulteración de la inmunosupresión profiláctica ve a menudo en el trasplante cardíaco heterotópico (2, 4).
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Disclosures
No hay conflictos de interés declarado.
Acknowledgments
Los autores agradecen a Christiane Pahrmann por su trabajo histológico.
Financiamiento
Sonja Schrepfer ha recibido una beca de investigación de la Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) (SCHR992 / 3 1 y SCHR992/4-1).]
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Surgical microscope (magnification 25x) | |||
| Isoflurane | |||
| shaver | |||
| Provo-Iodine | |||
| ice cold 0.9% saline | |||
| prewarmed 0.9% sterile saleine | |||
| eye ointment | |||
| glove | |||
| microsurgical scissirs | |||
| forceps | |||
| clamps | |||
| 8-0 suture (prolene) | |||
| 6-0 suture (prolene) | |||
| 5-0 suture (prolene) | |||
| Carprofen | |||
| Metamizol | |||
| Q-tips |
References
- Deuse, T., Hoyt, G., Koyanagi, T., Robbins, R. C., Schrepfer, S. Prevention and Inhibition But Not Reversion of Chronic Allograft Vasculopathy by FK778. Transplantation. 85, 870-877 (2008).
- Mennander, A., Tiisala, S., Halttunen, J., Yilmaz, S., Paavonen, T., Hayry, P. Chronic rejection in rat allografts. An experimental model for transplant arteriosclerosis. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 11, 671-680 (1991).
- Ono, K., Lindsey, E. S. Improved technique of heart transplantation in rats. J Thorac Cardiovasc Surg. 57, 225-225 (1969).
- Poston, R. S., Billingham, M., Hoyt, E. G. Rapamycin reverses chronic graft vascular disease in a novel cardiac allograft model. Circulation. 100, 67-100 (1999).
- Schrepfer, S., Deuse, T., Koch-Nolte, F., Krieger, T., Haddad, M., Schäfer, H., Pelletier, M. P., Robbins, R. C., Reichenspurner, H. FK778 in Experimental Xenotransplantation: A Detailed Analysis of Drug Efficacy. J Heart Lung Transplant. 26, 70-77 (2007).
