Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Medicine

同所性大動脈移植:慢性血管障害の発生研究のラットモデル

doi: 10.3791/1989 Published: December 4, 2010

Summary

このビデオでは、ラットでは移植の血管障害(TVP)の開発を研究するための単純なモデルとして同所性大動脈移植モデルを示しています。

Abstract

慢性拒絶反応の研究のモデルは、移植の血管障害(TVP)の開発中にpathobiologicalと病態生理学的プロセスを調査するために不可欠です。

心臓血管の慢性拒絶反応の研究のために一般的に使用される動物モデルは、実験用げっ歯類で行わ異所性心移植モデルです。小野とリンジー(3)それらの技法を発表して以来、このモデルは実験で広く使用されています。血管での調査結果を分析するために、心臓を切片にする必要がありますし、すべての船舶は、測定する必要があります。

心血管questioningsの慢性拒絶反応を調査する別の方法では、大動脈移植モデル(1,2)である。同所性大動脈移植モデルでは、大動脈を容易に組織学的に(2)評価することができます。急性血管性拒絶反応は、我々は臨床の現場で見つかったものと似てCAVの発症を予防していない主要な交絡因子とシクロス​​ポリンA(CSA)の治療、(4ではないのでPVG -に- ACIモデルは、CAVの研究に特に便利です。 )。 CsAのA7日間は、急性拒絶反応を防ぐためとTVPの開発と長期生存を達成するために、このモデルでは必須です。

このモデルはまた、異種のモデル(5)における急性細胞性拒絶反応とメディアの壊死を調査するために使用することができます。

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

約250〜300グラムの重さのラットを、チャールズリバー(Sandhoferウェグ7、D - 97633 Sulzfeld)から購入しています。
移植は、レシピエントのドナー、およびACIラットとしてPVGラットを使用して実行されます。

ラットは通常の条件、飼育標準ラット固形飼料および水を自由libidum下に収容されています。

すべての手術器具は使用前に滅菌されています。

ドナーの準備:

誘導チャンバーを用いて(2,5-3%)イソフルランでラットを麻酔。

  1. 腹部と胸部の毛を剃ると、その背中にラットを配置し、麻酔を維持するために、その鼻と口にフェイスマスクを置く。
  2. 広くプロボ-ヨウ素を使用して腹部と胸部領域を駆除する、次回の使用の80%エタノール、このステップを3回繰り返します。
  3. ラットがanesthesized十分であることを確認するために後肢の足をつまんで反射神経をチェックしてください。
  4. 腹部を開いて腹部大動脈に穴をカットすることでラットを放血させる。
  5. 慎重に下行胸部大動脈を見つけるために胸部を開きます。
  6. 脂肪、神経、食道などの周囲の組織から胸部大動脈を解剖。
  7. 大動脈の組織のダメージを与えることなく、肘当てを使用して大動脈の1.5センチメートル一部を撤回する。
  8. 冷滅菌生理食塩水で十分に大動脈移植を灌流と4でグラフト℃にて保存してください。

受信者:

誘導チャンバーを用いて(2,5-3%)イソフルランでラットを麻酔。体温は、手術中維持されます。

  1. 腹部領域のひげをそると麻酔中に乾燥から目を防ぐために、眼軟膏を適用する。
  2. その背中にネズミを置き、麻酔を維持するために、その鼻と口にフェイスマスクを置く。
  3. このステップを3回繰り返す、80%エタノールを使用する次のプロボ、ヨウ素を使用して腹部を、消毒。
  4. ラットがanesthesized十分であることを確認するために後肢の足をつまんで反射神経をチェックしてください。
  5. 腹部を開くには二つのステップで皮膚や筋肉を分離正中腹部切開を行います。
  6. 暖めた生理食塩水しっとりパウダーフリー手袋で腸を置きます。水分の損失を防ぐために、腸の周りに手袋を折る。
  7. 腹部大動脈をカバーする脂肪組織を削除します。
  8. 大動脈の血管の枝にダメージを与えるように注意して、分岐する大動脈領域を形成する解剖。
  9. 大動脈の必要なライゲーション枝場合。
  10. 最初の血流を停止するには解離した大動脈の大動脈部分に顕微クランプを使用してください。
  11. 次に、大動脈の分岐部に近い秒クランプを配置します。
  12. 今すぐ血流が停止していることを、大動脈の短いセグメントを削除します。
  13. 氷の上に0.9%滅菌生理食塩水に保たれているドナーの大動脈移植片を、取る、適切な長さに短縮し、ギャップに配置します。
  14. 8から0 proleneの縫合糸(エチコン、ノルダーシュテット、ドイツ)を使用して実行中の縫合を行う、受信者の大動脈へのドナーの大動脈を接続します。頭蓋エンドツーエンドの吻合で始まります。
  15. 遠位端々吻合が終了すると、慎重に遠位クランプを開きます。
  16. 出血は、遠位クランプを開いた後がないときは、慎重に頭蓋クランプを開きます。縫合糸で出血の場合には、出血を見つけ、一つのステッチを使用して出血を止める、再びクランプを閉じます。
  17. 大動脈の遠位端に表示されるパルスがあるはずです。
  18. 次の腹部に戻して腸を動かす。
  19. 温めておいた滅菌生理食塩水で腹部をフラッシュします。
  20. 6から0 prolene実行中の縫合糸(エチコン、ノルダーシュテット、ドイツ)を使用して腹壁の筋層を閉じます。
  21. 皮膚を閉じるには、縫合糸を実行している5から0 prolene(エチコン、ノルダーシュテット、ドイツ)を使用してください。
  22. ラットが麻酔に入れたまま、皮下カルプロフェンを4-5mg/kg注入する。
  23. 手順のこのタイプのための十分な鎮痛を提供するために、metamizolは3日後に移植のための鎮痛薬のための飲料水(100mlあたり50mgのMetamizol)に追加されます。

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

いくつかの理由のために我々は、同所性大動脈移植モデルの異所性心移植モデルに比べてTVPの開発を調査するため、より正確な方法を見つけました。
手術手技に関しては、大動脈移植モデルでは、異所性心臓移植モデルは外科医のスキルに、より複雑でエラーが発生しやすい課題を考えることができるのに対し、単独でエンドツーエンド吻合の成果を必要とする、容易に実現可能な方法を具体化、二つの大きな血管に端側吻合を必要とする。

移植の血管障害が1つの唯一の定義された直径の容器の代わりに、目的を得ることで研究者には不利ができる大きさと憲法の広大な変化を示す多数の小さな心臓の血管の探査で検討されることがありますので、組織学的標本の分析および測定を大幅に促進されると信頼できる結果。異所性心臓移植モデルではそれは大きな個体間変動の根底にある周囲や心筋の血管を比較することは困難である一方、受信者の胸部大動脈は、直径と形態学的外観の比較の容易で信頼性の高いオブジェクトを提供し、通常のコントロールとして機能することができる。

これらの所見に加えて、大動脈同種移植片は、適​​用の外科的処置に起因する破壊的な組織学的変化のように起こらないよう設計されています。線維症や心筋梗塞がで発生し、場合によっては、評価には適していませんレンダリング、異所性心臓移植の組織と埋め込まれた船舶に影響を与える可能性があります。

の筋細胞壊死、このような同心円状の内膜肥厚の程度として、大動脈の血管壁の三層のそれぞれの内に、形態学的生化学的および分子モデリングのシンプルかつ正確な調査に理想的な対象である、その大きさと憲法に起因するメディアまたはサイトカインや成長因子の増加合成。

大動脈同種移植によって生成された免疫応答は、実際に移植の慢性的な変化を引き起こすのに十分ですが、急性拒絶反応(2)を誘導するには不十分が判明した。移植片のこの中間の免疫原性のおかげで、ない移植は、急性拒絶反応とシクロス​​ポリンとのない初期の免疫抑制治療が必要ですに失われることはありません。モデルは、このように、しばしば異所性心臓移植(2、4)に見られるように予防的免疫抑制による影響や混ぜ物なしに慢性同種移植片の血管障害に対する薬剤の初期効果を調査することができます。

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

利害の衝突は宣言されません。

Acknowledgments

著者は、彼女の組織学的仕事のためクリスティPahrmannに感謝。

資金

ソーニャSchrepferは、ドイツ学術振興協会(DFG)(SCHR992 / 3 1及びSCHR992/4-1)から研究助成を受けています。]

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Surgical microscope (magnification 25x)
Isoflurane
shaver
Provo-Iodine
ice cold 0.9% saline
prewarmed 0.9% sterile saleine
eye ointment
glove
microsurgical scissirs
forceps
clamps
8-0 suture (prolene)
6-0 suture (prolene)
5-0 suture (prolene)
Carprofen
Metamizol
Q-tips

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Deuse, T., Hoyt, G., Koyanagi, T., Robbins, R. C., Schrepfer, S. Prevention and Inhibition But Not Reversion of Chronic Allograft Vasculopathy by FK778. Transplantation. 85, 870-877 (2008).
  2. Mennander, A., Tiisala, S., Halttunen, J., Yilmaz, S., Paavonen, T., Hayry, P. Chronic rejection in rat allografts. An experimental model for transplant arteriosclerosis. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 11, 671-680 (1991).
  3. Ono, K., Lindsey, E. S. Improved technique of heart transplantation in rats. J Thorac Cardiovasc Surg. 57, 225-225 (1969).
  4. Poston, R. S., Billingham, M., Hoyt, E. G. Rapamycin reverses chronic graft vascular disease in a novel cardiac allograft model. Circulation. 100, 67-100 (1999).
  5. Schrepfer, S., Deuse, T., Koch-Nolte, F., Krieger, T., Haddad, M., Schäfer, H., Pelletier, M. P., Robbins, R. C., Reichenspurner, H. FK778 in Experimental Xenotransplantation: A Detailed Analysis of Drug Efficacy. J Heart Lung Transplant. 26, 70-77 (2007).
同所性大動脈移植:慢性血管障害の発生研究のラットモデル
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Stubbendorff, M., Deuse, T., Hammel, A., Robbins, R. C., Reichenspurner, H., Schrepfer, S. Orthotopic Aortic Transplantation: A Rat Model to Study the Development of Chronic Vasculopathy. J. Vis. Exp. (46), e1989, doi:10.3791/1989 (2010).More

Stubbendorff, M., Deuse, T., Hammel, A., Robbins, R. C., Reichenspurner, H., Schrepfer, S. Orthotopic Aortic Transplantation: A Rat Model to Study the Development of Chronic Vasculopathy. J. Vis. Exp. (46), e1989, doi:10.3791/1989 (2010).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter