Summary
Bu video sıçanlarda nakli vaskülopati (TVP) gelişimini incelemek için basit bir model olarak spontan aort nakli modeli göstermektedir.
Abstract
Kronik rejeksiyon Araştırma modelleri, nakli vaskülopati (TVP) gelişimi sırasında pathobiological ve patofizyolojik süreçleri araştırmak için çok önemlidir.
, Kardiyovasküler kronik rejeksiyon çalışmalar için yaygın olarak kullanılan hayvan modelinde laboratuvar kemirgenlerde yapılan heterotopik kalp nakli modeli. Bu model, Ono ve Lindsey (3) tekniği yayınlanan deneylerde yaygın olarak kullanılmaktadır. Bulguları analiz etmek için kan damarları, kalp kesitli olmalı ve tüm gemilerin ölçülecek.
Kardiyovasküler questionings kronik rejeksiyon araştırmak için başka bir yöntem aort nakli modeli (1, 2). Spontan aort nakli model, aort kolayca histolojik (2) değerlendirilir olabilir. Akut vasküler rejeksiyon benzer klinik ortamda bulmak CAV gelişimine engel değildir önemli bir karıştırıcı faktör ve Siklosporin A (CsA) tedavisi, (4 olduğundan, SHA-to-ACI modeli, CAV çalışmaları için özellikle yararlıdır. .) Akut rejeksiyon önlemek ve TVP gelişimi ile uzun süreli sağkalım elde etmek için bu modeli A7-CsA günlük süre gereklidir.
Bu model aynı zamanda xenogeneic modelleri (5) akut hücresel ret ve medya nekroz araştırmak için kullanılabilir.
Protocol
Charles River (Sandhofer Weg 7, D-97.633 Sulzfeld) yaklaşık 250-300g ağırlığında Sıçanlar satın alınır.
Nakli PVG bağışçılar olarak sıçan ve alıcıları olarak ACI sıçanlarda kullanılarak yapılmaktadır.
Sıçanlar geleneksel koşulları, beslenen standart sıçan yemi ve su reklam libidum altında muhafaza edilir.
Tüm cerrahi aletler kullanmadan önce sterilize edilir.
Donör hazırlanması:
Indüksiyon odasına kullanarak izofluran ile sıçan (% 2,5-3) anestezisi.
- Abdominal ve torasik saç Tıraş ve sırtında sıçan ve anestezi yetişmek için burun ve ağız içinde bir facemask yere yerleştirin.
- Provo-İyot, bir sonraki kullanım% 80 etanol, bu adımı üç kez tekrarlayacak ve yaygın karın ve göğüs bölgesi dezenfekte edin.
- Arka ayakları sıçan yeterli anesthesized olduğundan emin olmak için refleksler kısma kontrol edin.
- Karın ve abdominal aort içine bir delik açarak sıçan asıl bulbus olfaktoryusları alındı.
- Toraks inen torasik aorta bulmak için dikkatlice açın.
- Torasik aorta, yağ, sinirler ve yemek borusu gibi çevre dokulara parçalara ayır.
- Aort doku hasarı olmadan, bir couter kullanarak aort 1.5cm parça çekin.
- Soğuk steril serum fizyolojik ile iyice aort greft serpmek ve 4 greft saklamak ° C
Alıcı:
Indüksiyon odasına kullanarak izofluran ile sıçan (% 2,5-3) anestezisi. Vücut ısısı, cerrahi işlem sırasında korunur.
- Karın bölgesinde Tıraş ve gözleri anestezi sırasında kurumasını önlemek için göz merhemi geçerlidir.
- Sırtında sıçan yerleştirin ve anestezi tutmak için burun ve ağız içinde bir facemask yerde.
- Provo-İyot, bir sonraki kullanım% 80 etanol, bu adımı üç kez tekrarlayın kullanarak karın bölgesi dezenfekte edin.
- Arka ayakları sıçan yeterli anesthesized olduğundan emin olmak için refleksler kısma kontrol edin.
- Karın açmak için iki adımda cilt ve kas ayıran orta hat abdominal kesi gerçekleştirin.
- Isıtılmış bir tuzlu nemli toz ücretsiz eldiven bağırsak yerleştirin. Bağırsakların çevresinde nem kaybını önlemek için eldiven katlayın.
- Yağ dokusu abdominal aorta kapsayan çıkarın.
- Aort damarları dallar üzerinde zarar vermemek için, dikkatli, çatallanma infrarenal bölgede formu parçalara ayır.
- Eğer aort gerekli Arter dalları.
- İlk kan akışını durdurmak için disseke aorta infrarenal bir mikrocerrahi kelepçe kullanın.
- Sonra, ikinci bir kelepçe aorta bifurkasyon yakın yerleştirin.
- Aort, kan akışı durdu Şimdi kısa bir bölümü çıkarın.
- Yeterli süresini kısaltmak ve bu boşluğu konumu, buz üzerinde% 0,9 steril serum fizyolojik tutulduğu donör aort greft, ele alalım.
- 8-0 prolen sütür (Ethicon, Norderstedt, Almanya) kullanarak çalışan sütür yerine donör alıcı aort aort bağlayın. Kraniyal uçtan-uca anastomoz ile başlayın.
- Distal uçtan-uca anastomoz bittiğinde, distal kelepçe dikkatli bir şekilde açın.
- Distal klemp açıldıktan sonra herhangi bir kanama olduğunda, kraniyal kelepçe dikkatli bir şekilde açın. Sütür kanama halinde, kelepçe yine yakın kanama bulmak ve tek bir dikiş kullanarak kanamayı durdurmak.
- Aort distal sonunda görünür bir darbe olmamalıdır.
- Sonraki bağırsaklar karın içine taşıyın.
- Karın prewarmed steril tuzlu su ile yıkayın.
- 6-0 prolen çalışan dikişler (Ethicon, Norderstedt, Almanya) ile karın duvarı kas tabakası kapatın.
- Cilt kapatmak için sütürlerinin 5-0 prolen (Ethicon, Norderstedt, Almanya) kullanın.
- Rat anestezi hala iken, subkutan Carprofen 4-5mg/kg enjekte edilir.
- Bu tür işlem için yeterli analjezi sağlamak için, metamizol 3 gün transplantasyon sonrası için ağrı kesici ilaçlar için içme suyu (100ml ortalama 50 mg metamizol) eklenir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Birçok nedenden dolayı biz ortotopik aort nakli modeli heterotopik kalp transplantasyonu modeli ile karşılaştırıldığında TVP gelişimini araştırmak için daha doğru bir şekilde bulundu:
Heterotopik kalp nakli modeli cerrah lar becerileri daha karmaşık ve hata eğilimli bir meydan okuma olarak kabul edilebilir ise, cerrahi teknik konusunda aort nakli modeli, yalnızca bir başarı end-to-end anastomoz gerektiren, kolay uygulanabilir bir yöntem şekillendirir iki ana damarları uç-yan anastomoz gerektiren.
Histolojik örneklerin analiz ve ölçüm büyük ölçüde tek bir kap içinde bir tek amacı kazanıyor araştırmacı engelli olabilir boyut ve anayasa geniş bir çeşitlilik gösteren çok sayıda küçük kalp damarlarının keşif yerine tanımlanan çapı nakli vaskülopati muayene olabilir beri kolaylaştırmış ve güvenilir sonuçlar. Alıcının torasik aorta heterotopik kalp transplantasyonu modeli büyük bir arası değişkenlik altında yatan peri-veya miyokard gemiler karşılaştırmak zor iken, çapı ve morfolojik görünüm karşılaştırmanın kolay ve güvenilir bir nesne sunan, normal kontrol olarak hizmet verebilir.
Bu bulgulara ek olarak, aort allogreftler uygulanan cerrahi işlemler sonucu yıkıcı histolojik değişiklikler kadar yatkın değildir. Fibrozis veya infarkt meydana gelir ve muhtemelen bunları değerlendirme için uygun olmayan render, heterotopik kalp nakli için doku ve gömülü damarları etkileyebilir.
Büyüklüğü ve anayasa nedeniyle, aort konsantrik intimal kalınlaşma derece olarak damar duvarı üç tabakadan, miyosit nekroz her birinin içinde, morfolojik, biyokimyasal ve moleküler remodeling basit ve kesin bir soruşturma için ideal bir konudur medya ya da artmış sitokinler ve büyüme faktörlerinin sentezi.
Aortik allogreft tarafından oluşturulan immün yanıt gerçekten nakli kronik değişiklikler tetiklemek için yeterli, ancak akut rejeksiyon ataklar (2) ikna etmek için yeterli bulunmuştur. Greft bu ara immünojenite sayesinde, hiçbir nakli rejeksiyon ve CsA hiçbir başlangıç immünsupresif tedavi gerektirmez kaybolur. Modeli böylece heterotopik kalp nakli (2, 4) sıklıkla görülen profilaktik immünosupresyon etkisi ya da tağşiş olmadan kronik allogreft vaskülopati ilaçların ilk etkilerini araştırmak amacıyla sağlar.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Çıkar çatışması ilan etti.
Acknowledgments
Yazarlar Christiane Pahrmann onu histolojik çalışma için teşekkür ederim.
Harçlar
Sonja Schrepfer Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) (SCHR992 / 3 1 ve SCHR992/4-1) bir araştırma bursu aldı.]
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Surgical microscope (magnification 25x) | |||
| Isoflurane | |||
| shaver | |||
| Provo-Iodine | |||
| ice cold 0.9% saline | |||
| prewarmed 0.9% sterile saleine | |||
| eye ointment | |||
| glove | |||
| microsurgical scissirs | |||
| forceps | |||
| clamps | |||
| 8-0 suture (prolene) | |||
| 6-0 suture (prolene) | |||
| 5-0 suture (prolene) | |||
| Carprofen | |||
| Metamizol | |||
| Q-tips |
References
- Deuse, T., Hoyt, G., Koyanagi, T., Robbins, R. C., Schrepfer, S. Prevention and Inhibition But Not Reversion of Chronic Allograft Vasculopathy by FK778. Transplantation. 85, 870-877 (2008).
- Mennander, A., Tiisala, S., Halttunen, J., Yilmaz, S., Paavonen, T., Hayry, P. Chronic rejection in rat allografts. An experimental model for transplant arteriosclerosis. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 11, 671-680 (1991).
- Ono, K., Lindsey, E. S. Improved technique of heart transplantation in rats. J Thorac Cardiovasc Surg. 57, 225-225 (1969).
- Poston, R. S., Billingham, M., Hoyt, E. G. Rapamycin reverses chronic graft vascular disease in a novel cardiac allograft model. Circulation. 100, 67-100 (1999).
- Schrepfer, S., Deuse, T., Koch-Nolte, F., Krieger, T., Haddad, M., Schäfer, H., Pelletier, M. P., Robbins, R. C., Reichenspurner, H. FK778 in Experimental Xenotransplantation: A Detailed Analysis of Drug Efficacy. J Heart Lung Transplant. 26, 70-77 (2007).
