Flashは、E12.5マウス脳の凍結とCryosectioning

Summary

このビデオで明らかに瞬間冷凍のためのテクニックであり、マウスの胚脳組織をセクショニング。クリオスタットを使用するための有用なヒントが得られる組織のセクションは、クラックや他の歪みのないことを保証するために削減しながら使用できるトラブルシューティングの方法を含めて、与えられている。

Protocol

1. 希望の時間のためのPBS中4％パラホルムアルデヒドで細胞を固定してください。
2. スクロース注入組織（cryoprotection）
   1. 2059チューブにPBS w / vの30％ショ糖液を作る。
   2. PBSの組織が3倍リンス（ロッキング付き〜5分）。
   3. 30％ショ糖溶液中で組織を置きます。組織は、シンクしません。
   4. ℃で一晩、または、それが沈没するまで4で組織を置きます。
3. 情報と方向でcryomold適切なサイズのラベルを付けます。
4. （泡を避けるため）OCTでcryomoldを埋める。
5. OCTで、それをOCTの風呂に組織を移し、コート
6. cryomoldのOCTに組織を移す。
7. 顕微鏡下で東洋が組織。
8. プラスチックシャーレに液体窒素を注ぎます。
9. 迅速かつ慎重に窒素にcryomoldで組織を下げる。 （水没cryomoldの上部をしないでください。）
10. OCTは、白色固体の場合は、-80ストレージ℃の冷凍庫に凍結組織を置く。
11. 少なくとも30分間〜20℃に組織を平衡化させます。前の切片に。

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Tissue-Tek Cryomold	Ted Pella, Inc.	27181
O.C.T.	Ted Pella, Inc.	27050
Sucrose solution			30% sucrose solution in PBS w/v
paraformaldehyde			4% paraformaldehyde in PBS