Overview
In questo articolo discutiamo come stabilire un modello di cancro al seno nei topi femmine iniettando cellule tumorali del seno nel cuscinetto grasso mammario. Il protocollo di esempio illustra l'iniezione ortotopica.
Protocol
Gli esperimenti sugli animali sono stati condotti in conformità con la disposizione e la raccomandazione generale della legislazione cinese sull'amministrazione animale sperimentale e sono stati approvati dall'Institution of Animal Care and Use Committee of Capital Medical University (Rif n. AEEI-2014-052). Sono stati utilizzati topi Balb/c femmina di età compresa tra 6 e 8 settimane.
1. Preparazione delle cellule e degli animali
- Un giorno prima dell'operazione, radere i capelli intorno ai quattro capezzoli per esporre l'area operativa.
- Usa una mano per tenere il mouse saldamente sul retro per assicurarti che il mouse non si muova liberamente, alza il mouse per esporre la pancia all'operatore e quindi usa un'altra mano per radere la pelliccia intorno al quarto capezzolo con un rasoio elettronico.
- Mettere un sottile strato di crema per la depilazione intorno ai capezzoli per 30 - 60 s, pulire la crema con acqua distillata e quindi asciugare il mouse con carta morbida.
- Il giorno dell'operazione, raccogliere le cellule tumorali del seno murino (4T1-luc2), contare il numero di cellule e regolare la densità cellulare a 2 x 105 cellule / ml in soluzione salina tamponata da fosfati (PBS) in tubi di microcentrifugo sterile e tenerli sul ghiaccio. Per ogni topo vengono preparate 1 x10 4 cellule/50 μL in una siringa da 1 ml.
2. Iniezione ortotopica
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Anestesia dei topi
- Indurre l'anestesia. Mettere i topi in un contenitore trasparente chiuso e accendere il 2% di gas isoflurane per anestetizzare i topi per circa 5 minuti, fino a quando non si sdraiano tutti e si addormentano.
- Mantenere l'anestesia. Trasferire i topi dal contenitore alle singole maschere di anestesia, mettere un unguento veterinario sugli occhi per evitare secchezza, tenere i topi supinamente con i capezzoli esposti all'operatore e lasciare che continuino a inalare gas isoflurane per alcuni minuti fino a quando l'iniezione non è stata eseguita.
- Confermare il successo dell'anestesia per la mancanza di un riflesso di prelievo del dito del dito del piedi.
- Applicare un unguento oftalmico agli occhi dei topi per prevenire la secchezza degli occhi.
NOTA In base alle dimensioni del contenitore e al numero di maschere di anestesia individuali disponibili, un gruppo di topi può essere anestetizzato insieme e iniettato uno per uno in anestesia individuale.
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Prestazioni dell'iniezione
- Usa una mano per tendere la pelle intorno al quarto capezzolo con una pinzetta, per impostare un "tunnel" sollevato da seguire per la siringa. Utilizzare l'altra mano per tenere la siringa con l'ago rivolto verso l'alto per entrare per via sottocutanea nella pelle a 5 - 10 mm dal capezzolo; quindi, seguire il "tunnel" fino a quando la punta dell'ago si avvicina al capezzolo, spostare attentamente la punta dell'ago nel cuscinetto grasso mammario fino a quando l'occhio dell'ago non entra sotto la punta del capezzolo, scartare le pinzette e iniettare lentamente le cellule.
- Girare un po 'intorno all'ago e ritrarre lentamente la siringa; utilizzare un batuffolo di cotone per premere la ferita dell'ago per 10 - 20 s per assicurarsi che non vi siano infiltrazioni di liquidi.
- Osservare il quarto capezzolo per confermare un'iniezione riuscita: una sfera piatta bianca trasparente con il capezzolo come centro può essere osservato (Figura 1).
- Mantenere i topi anestetizzati per un altro minuto per evitare di lasciare che i topi si riprendano e si muovano troppo rapidamente, il che farà sì che la ferita dell'iniezione si apra e le cellule tumorali perdano.
Figura 1: Immagini prima e dopo l'iniezione ortotopica presso il cuscinetto grasso mammario di topi Balb/c femminili. L'operazione è stata eseguita e le foto sono state scattate mentre i topi erano sotto anestesia isoflurana. A, prima dell'iniezione, B, dopo iniezione.
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Materials
Name | Company | Catalog Number | Comments |
anesthesia machine | Midmark Corporation, Dayton, OH, USA | Matrx VMS | anesthesia |
isoflurane | Hebei yipin chemical reagents company | O21400 | anesthesia |
1 mL syringe | Becton, Dickinson and Company | A257 | cell injection |
hair removal cream | Veet | - | hair removal cream |
Carbomer Eye Gel | Dr.GerhardMannChem-Pharm.FabrikGmbH | - | ophthalmic ointment |