הזרקה אורתוטופית לתוך כרית שומן Mammary: הקמת סרטן השד בעכברים

Overview

במאמר זה אנו דנים כיצד להקים מודל סרטן השד בעכברים נקבה על ידי הזרקת תאים סרטניים בשד לתוך כרית שומן חלבי. פרוטוקול הדוגמה מדגים את ההזרקה האורתוטופית.

Protocol

ניסויים בבעלי חיים נערכו בהתאם להוראה ולהמלצה הכללית של החקיקה הסינית ניסיונית למינהל בעלי חיים ואושרו על ידי הוועדה לטיפול בבעלי חיים ושימוש של האוניברסיטה הרפואית קפיטל (Ref no. AEEI-2014-052). נקבת עכברי Balb/c בגילאי 6 עד 8 שבועות שימשו.

1. הכנת התאים ובעלי החיים

1. יום אחד לפני הניתוח, לגלח את השיער סביב הפטמות הרביעית כדי לחשוף את אזור ההפעלה.
   1. השתמש ביד אחת כדי להחזיק את העכבר בחוזקה מאחור כדי לוודא שהעכבר לא יזוז בחופשיות, להפוך את העכבר כדי לחשוף את בטנו למפעיל, ולאחר מכן להשתמש ביד אחרת כדי לגלח את הפרווה סביב הפטמות הרביעי עם מכונת גילוח אלקטרונית.
   2. שים שכבה דקה של קרם להסרת שיער סביב הפטמות במשך 30 - 60 s, לנקות את השמנת עם מים מזוקקים, ולאחר מכן לייבש את העכבר עם נייר רך.
2. ביום הניתוח, לאסוף תאים סרטניים בשד מורין (4T1-luc2), לספור את מספר התא, ולהתאים את צפיפות התא ל 2 x 10⁵ תאים / מ"ל מלוחים אגירת פוספט (PBS) בצינורות microcentrifuge סטרילי ולשמור אותם על הקרח. עבור כל עכבר, 1 x 10⁴ תאים / 50 μL במזרק 1 מ"ל מוכן.

2. הזרקה אורתוטופית

1. הרדמה של עכברים
   1. לגרום להרדמה. שים את העכברים במיכל שקוף סגור והפעל 2% גז isoflurane כדי להרדים את העכברים במשך כ 5 דקות, עד שכולם לשכב ולהירדם.
   2. לשמור על הרדמה. מעבירים את העכברים מהמכל למסכות הרדמה בודדות, שמים משחה וטרינרית על עיניהם כדי למנוע יובש, שומרים על העכברים סופיים עם הפטמות חשופות למפעיל, ומניחים להם להמשיך לשאוף גז איזופלורן במשך כמה דקות עד שההזרקה בוצעה.
   3. לאשר את ההצלחה של הרדמה על ידי היעדר רפלקס נסיגה צביטה בוהן.
   4. החל משחה עיניים על העיניים של העכברים כדי למנוע יובש בעין.
      שים לב בהתאם לגודל המיכל ומספר מסכות ההרדמה הבודדות הזמינות, ניתן להרדים קבוצה של עכברים יחד ולהזריק אחד אחד תחת הרדמה אישית.
2. ביצועי ההזרקה
   1. השתמש ביד אחת כדי אוהל את העור סביב הפטמה הרביעית עם פינצטה, כדי להקים "מנהרה" מרוממת עבור המזרק לעקוב. השתמש ביד השנייה כדי להחזיק את המזרק עם המחט פנה כלפי מעלה כדי להזין את העור בתת עורית ב 5 - 10 מ"מ מהפטמה; לאחר מכן, בצע את "מנהרה" עד קצה המחט מתקרב הפטמה, בזהירות להזיז את קצה המחט לתוך כרית שומן mammary עד עין המחט מגיע מתחת לקצה הפטמה, להשליך את פינצטה, ולהזריק את התאים לאט.
   2. לסובב את המחט קצת ולבטל את המזרק לאט; השתמש ספוגית כותנה ללחוץ על פצע המחט במשך 10 - 20 s כדי לוודא שאין חלחול נוזלים.
   3. שימו לב לפטמה הרביעית כדי לאשר זריקה מוצלחת: כדור שטוח שקוף לבן אחד עם הפטמה כפי שניתן לראות במרכז (איור 1).
3. שמור על העכברים מורדמת למשך דקה נוספת כדי למנוע לתת לעכברים להתאושש ולנוע מהר מדי, מה שיגרום לפצע ההזרקה להיפתח ולתאי הגידול לדלוף החוצה.

איור 1: תמונות לפני ואחרי ההזרקה האורתוטופית על כרית השומן הענקית של עכברי Balb/c נקבה. הניתוח בוצע, והתמונות צולמו בזמן שהעכברים היו תחת הרדמה isoflurane. A, לפני הזרקה, B, לאחר הזרקה.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
anesthesia machine	Midmark Corporation, Dayton, OH, USA	Matrx VMS	anesthesia
isoflurane	Hebei yipin chemical reagents  company	O21400	anesthesia
1 mL syringe	Becton, Dickinson and  Company	A257	cell injection
hair removal cream	Veet	-	hair removal cream
Carbomer Eye Gel	Dr.GerhardMannChem-Pharm.FabrikGmbH	-	ophthalmic ointment