Overview
इस लेख में हम चर्चा कैसे स्तन कैंसर की कोशिकाओं को स्तन वसा पैड में इंजेक्शन द्वारा महिला चूहों में एक स्तन कैंसर मॉडल स्थापित करने के लिए । उदाहरण प्रोटोकॉल ऑर्थोटोपिक इंजेक्शन को दर्शाता है।
Protocol
पशु प्रयोग चीनी प्रायोगिक पशु प्रशासन कानून के प्रावधान और सामान्य सिफारिश के अनुसार आयोजित किए गए थे और राजधानी चिकित्सा विश्वविद्यालय (रेफरी नहीं) की पशु देखभाल और उपयोग समिति की संस्था द्वारा अनुमोदित किए गए थे । एईईआई-2014-052) । 6 से 8 सप्ताह की आयु के मादा बाल्ब/सी चूहों का इस्तेमाल किया गया ।
1. कोशिकाओं और जानवरों की तैयारी
- ऑपरेशन से एक दिन पहले, ऑपरेटिंग क्षेत्र का पर्दाफाश करने के लिए चौथे निपल्स के आसपास बालों को दाढ़ी।
- माउस को पीठ पर कसकर पकड़ने के लिए एक हाथ का उपयोग करें ताकि यह सुनिश्चित किया जा सके कि माउस स्वतंत्र रूप से आगे नहीं बढ़ेगा, ऑपरेटर को अपने पेट को बेनकाब करने के लिए माउस को चालू करें, और फिर एक इलेक्ट्रॉनिक शेवर के साथ चौथे निपल्स के चारों ओर फर को दाढ़ी बनाने के लिए एक और हाथ का उपयोग करें।
- 30 - 60 एस के लिए निपल्स के चारों ओर बाल हटाने क्रीम की एक पतली परत रखो, आसुत पानी के साथ क्रीम को साफ करें, और फिर नरम कागज के साथ माउस को सुखा दें।
- ऑपरेशन के दिन, मुरीन स्तन कैंसर कोशिकाओं (4T1-luc2) को इकट्ठा करें, सेल नंबर की गणना करें, और सेल घनत्व को बाँझ माइक्रोसेंट्रफ्यूज ट्यूबों में फॉस्फेट-बफर खारा (पीबीएस) में 2 x 105 कोशिकाओं/एमएल में समायोजित करें और उन्हें बर्फ पर रखें। प्रत्येक माउस के लिए 1-एमएल सिरिंज में 1 x 104 कोशिकाएं/50 माइक्रोन तैयार की जाती हैं।
2. ऑर्थोटोपिक इंजेक्शन
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चूहों का संज्ञाहरण
- संज्ञाहरण प्रेरित करें। चूहों को एक बंद पारदर्शी कंटेनर में रखें और चूहों को लगभग 5 मिनट तक एनेस्थेटाइज करने के लिए 2% आइसोफ्लुन गैस चालू करें, जब तक कि वे सभी लेट न जाएं और सो न जाएं।
- संज्ञाहरण बनाए रखें। कंटेनर से चूहों को अलग-अलग संज्ञाहरण मास्क में स्थानांतरित करें, सूखापन से बचने के लिए उनकी आंखों पर कुछ पशु चिकित्सक मरहम लगाएं, चूहों को ऑपरेटर के संपर्क में आने वाले अपने निपल्स के साथ रखें, और इंजेक्शन किए जाने तक उन्हें कुछ मिनटों तक आइसोफ्लुन गैस को श्वास लेना जारी रखने दें।
- एक टो चुटकी वापसी पलटा की कमी से संज्ञाहरण की सफलता की पुष्टि करें।
- आंखों के सूखापन को रोकने के लिए चूहों की आंखों पर नेत्र मरहम लगाएं।
नोट कंटेनर आकार और उपलब्ध व्यक्तिगत संज्ञाहरण मास्क की संख्या के अनुसार, चूहों के एक समूह को एक साथ एनेस्थेटाइज्ड किया जा सकता है और व्यक्तिगत संज्ञाहरण के तहत एक-एक करके इंजेक्शन लगाया जा सकता है।
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इंजेक्शन का प्रदर्शन
- चिमटी के साथ चौथे निप्पल के आसपास त्वचा को तंबू करने के लिए एक हाथ का उपयोग करें, सिरिंज का पालन करने के लिए एक उत्थान "सुरंग" स्थापित करने के लिए । सुई के साथ सिरिंज को पकड़ने के लिए दूसरे हाथ का उपयोग करें, जो निप्पल से 5 - 10 मिमी पर त्वचा में चमड़े के साथ प्रवेश करने के लिए ऊपर की ओर मुड़ गया; फिर, "सुरंग" का पालन करें जब तक सुई टिप निप्पल के करीब आता है, ध्यान से सुई टिप स्तन वसा पैड में ले जाने तक सुई आंख निप्पल टिप के नीचे आता है, चिमटी त्यागने, और कोशिकाओं को धीरे से सुई ।
- सुई के चारों ओर थोड़ा मुड़ें और सिरिंज को धीरे-धीरे वापस लें; यह सुनिश्चित करने के लिए कि सुई के घाव को 10 -20 एस के लिए दबाने के लिए एक कपास झाड़ू का उपयोग करें।
- एक सफल इंजेक्शन की पुष्टि करने के लिए चौथे निप्पल का निरीक्षण करें: केंद्र के रूप में निप्पल के साथ एक सफेद पारदर्शी फ्लैट क्षेत्र(चित्र 1)देखा जा सकता है।
- चूहों को एक और मिनट के लिए एनेस्थेटाइज्ड रखें ताकि चूहों को ठीक होने दिया जा सके और बहुत जल्दी आगे बढ़ सकें, जिससे इंजेक्शन घाव को खोलने और ट्यूमर कोशिकाओं को लीक करने का कारण बनेगा।
चित्रा 1: महिला Balb/c चूहों के स्तन वसा पैड पर ऑर्थोटोपिक इंजेक्शन से पहले और बाद में चित्र । ऑपरेशन किया गया था, और तस्वीरें ले जाया गया, जबकि चूहों isoflurane संज्ञाहरण के तहत किया गया । एक, इंजेक्शन से पहले, बी, इंजेक्शन के बाद।
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Materials
Name | Company | Catalog Number | Comments |
anesthesia machine | Midmark Corporation, Dayton, OH, USA | Matrx VMS | anesthesia |
isoflurane | Hebei yipin chemical reagents company | O21400 | anesthesia |
1 mL syringe | Becton, Dickinson and Company | A257 | cell injection |
hair removal cream | Veet | - | hair removal cream |
Carbomer Eye Gel | Dr.GerhardMannChem-Pharm.FabrikGmbH | - | ophthalmic ointment |