유방 지방 패드에 정형 소 주입: 쥐에 있는 유방암 을 확립

Overview

이 기사에서는 유방 지방 패드에 유방암 세포를 주입하여 여성 마우스에서 유방암 모델을 확립하는 방법에 대해 논의합니다. 예제 프로토콜은 치열 교정 주입을 보여 줍니다.

Protocol

동물 실험은 중국 실험 동물 관리 법안의 조항 및 일반 권고에 따라 수행되었으며 자본 의과 대학의 동물 관리 및 사용 위원회의 승인을 받았습니다 (Ref No. AEEI-2014-052). 6~8주 세의 암컷 발브/c 마우스가 사용되었습니다.

1. 세포와 동물의 준비

1. 수술 하루 전에 네 번째 젖꼭지 주위에 머리카락을 면도하여 수술 영역을 노출시하십시오.
   1. 한 손으로 마우스를 뒤쪽에 단단히 잡고 마우스가 자유롭게 움직이지 않도록 하고 마우스를 켜서 배의 배를 운전자에게 노출한 다음 다른 손을 사용하여 전자 면도기로 네 번째 젖꼭지 주위의 털을 면도합니다.
   2. 30-60s의 젖꼭지 주위에 얇은 제모 크림층을 넣고 증류수로 크림을 청소한 다음 부드러운 종이로 마우스를 건조시십시오.
2. 수술 당일, 뮤린 유방암 세포(4T1-luc2)를 수집하고, 세포 수를 계산하고, 멸균 미세원심분리기 튜브에서 인산염 완충식염수(PBS)에서 세포 밀도를 2 x 10⁵ 세포/mL로 조절하고 얼음에 보관한다. 각 마우스에 대해 1mL 주사기에 1 x 10⁴ 셀/50 μL이 준비됩니다.

2. 정형소 주입

1. 쥐의 마취
   1. 마취를 유도합니다. 마우스를 닫힌 투명 용기에 넣고 2% 이소플루란 가스를 켜서 쥐를 약 5분 동안 마취하여 모두 누워 잠들 때까지 하십시오.
   2. 마취를 유지합니다. 용기에서 개별 마취 마스크로 마우스를 옮기고, 건조를 피하기 위해 일부 수의사 연고를 눈에 넣고, 작업자에게 노출된 젖꼭지로 마우스를 수피적으로 유지하고, 주사가 수행될 때까지 몇 분 동안 이소플루란 가스를 흡입하도록 합니다.
   3. 발가락 핀치 철수 반사의 부족에 의해 마취의 성공을 확인합니다.
   4. 눈 건조를 방지하기 위해 마우스의 눈에 안과 연고를 적용합니다.
      참고 사항 용기 크기 및 사용 가능한 개별 마취 마스크의 수에 따라, 마우스의 그룹은 함께 마취하고 개별 마취하에 하나씩 주입 될 수있다.
2. 주사의 성능
   1. 한 손으로 핀셋으로 네 번째 젖꼭지 주위의 피부를 텐트에 대고 주사기가 따라갈 수 있도록 고양된 "터널"을 설정합니다. 다른 한편으로 바늘로 주사기를 위쪽으로 돌리면 젖꼭지로부터 5-10mm에서 피하로 피부에 들어가십시오. 그런 다음 바늘 끝이 젖꼭지에 가까이 올 때까지 "터널"을 따라 바늘 눈이 젖꼭지 팁 아래에 올 때까지 조심스럽게 유방 지방 패드로 바늘 팁을 이동하고 핀셋을 버리고 세포를 천천히 주입하십시오.
   2. 바늘을 조금 돌리고 주사기를 천천히 철회합니다. 면봉을 사용하여 바늘 상처를 10-20 초로 눌러 유체 가시가 없는지 확인하십시오.
   3. 네 번째 젖꼭지를 관찰하여 성공적인 주사를 확인한다: 중앙으로 젖꼭지를 가진 백색 투명 평면 구1개(도 1).
3. 마우스가 너무 빨리 회복되고 움직이지 못하게 하기 위해 또 다른 분 동안 마취된 마우스를 유지하여 주사 상처가 열리고 종양 세포가 누출됩니다.

그림 1: 여성 Balb/c 마우스의 유방 지방 패드에서 치열 교정 주사 전후의 사진. 수술은 수행되었고, 마우스가 이소플루란 마취 하에 있는 동안 사진을 찍었습니다. A, 주입 전, B, 주사 후.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
anesthesia machine	Midmark Corporation, Dayton, OH, USA	Matrx VMS	anesthesia
isoflurane	Hebei yipin chemical reagents  company	O21400	anesthesia
1 mL syringe	Becton, Dickinson and  Company	A257	cell injection
hair removal cream	Veet	-	hair removal cream
Carbomer Eye Gel	Dr.GerhardMannChem-Pharm.FabrikGmbH	-	ophthalmic ointment