Injeção Ortotópica na Almofada de Gordura Mamária: Estabelecendo o Câncer de Mama em Camundongos

Overview

Neste artigo discutimos como estabelecer um modelo de câncer de mama em camundongos do sexo feminino, injetando células cancerígenas de mama na almofada de gordura mamária. O protocolo de exemplo demonstra a injeção ortotópica.

Protocol

Os experimentos em animais foram realizados de acordo com a Disposição e Recomendação Geral da Legislação De Administração Experimental de Animais Chineses e foram aprovados pelo Comitê de Uso e Cuidados Com Animais da Universidade Médica da Capital (Ref no. AEEI-2014-052). Foram utilizados camundongos balb/c femininos de 6 a 8 semanas.

1. Preparação das Células e Animais

1. Um dia antes da operação, raspe o cabelo ao redor dos quatro mamilos para expor a área de operação.
   1. Use uma mão para segurar o mouse firmemente na parte de trás para ter certeza de que o mouse não se moverá livremente, vire o mouse para expor sua barriga ao operador e, em seguida, use outra mão para raspar a pele ao redor dos quartos mamilos com uma máquina de barbear eletrônica.
   2. Coloque uma fina camada de creme de depilação ao redor dos mamilos por 30 a 60 s, limpe o creme com água destilada e, em seguida, seque o mouse com papel macio.
2. No dia da operação, colete células cancerígenas de mama murina (4T1-luc2), conte o número celular e ajuste a densidade celular para 2 x 10⁵ células/mL em soro fisiológico tamponado por fosfato (PBS) em tubos microcentrifus estéreis e mantê-los no gelo. Para cada rato, 1 x 10⁴ células/50 μL em uma seringa de 1 mL é preparado.

2. Injeção Ortotópica

1. Anestesia de ratos
   1. Induzir anestesia. Coloque os ratos em um recipiente transparente fechado e ligue 2% de gás isoflurane para anestesiar os ratos por cerca de 5 minutos, até que todos se deitem e durmam.
   2. Mantenha anestesia. Transfira os ratos do recipiente para máscaras individuais de anestesia, coloque alguma pomada veterinária em seus olhos para evitar o ressecamento, mantenha os ratos supinomente com seus mamilos expostos ao operador e deixe-os continuar inalar gás isoflurane por alguns minutos até que a injeção tenha sido realizada.
   3. Confirme o sucesso da anestesia pela falta de um reflexo de retirada do dedo do dedo do dedo do dedo.
   4. Aplique pomada oftálmica aos olhos dos camundongos para evitar o ressecamento dos olhos.
      NOTA De acordo com o tamanho do contêiner e o número de máscaras de anestesia individuais disponíveis, um grupo de camundongos pode ser anestesiado e injetado um por um sob anestesia individual.
2. Desempenho da injeção
   1. Use uma mão para preparar a pele ao redor do quarto mamilo com pinças, para montar um "túnel" erguido para a seringa seguir. Use a outra mão para segurar a seringa com a agulha virada para cima para entrar na pele subcutânea a 5 - 10 mm do mamilo; em seguida, siga o "túnel" até que a ponta da agulha se aproxime do mamilo, mova cuidadosamente a ponta da agulha para cima na almofada de gordura mamária até que o olho da agulha fique sob a ponta do mamilo, descarte a pinça e injete as células lentamente.
   2. Vire a agulha um pouco e retraia a seringa lentamente; use um cotonete para pressionar a ferida da agulha por 10 a 20 s para ter certeza de que não há infiltração de fluido.
   3. Observe o quarto mamilo para confirmar uma injeção bem sucedida: uma esfera plana branca transparente com o mamilo como o centro pode ser observado(Figura 1).
3. Mantenha os camundongos anestesiados por mais um minuto para evitar deixar os ratos se recuperarem e se moverem muito rapidamente, o que fará com que a ferida de injeção se abra e as células tumorais vazem.

Figura 1: Fotos antes e depois da injeção ortotópica na almofada de gordura mamária de camundongos balb/c fêmeas. A operação foi realizada, e as fotos foram tiradas enquanto os ratos estavam sob anestesia isoflurane. A, antes da injeção, B, depois dainjeção.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
anesthesia machine	Midmark Corporation, Dayton, OH, USA	Matrx VMS	anesthesia
isoflurane	Hebei yipin chemical reagents  company	O21400	anesthesia
1 mL syringe	Becton, Dickinson and  Company	A257	cell injection
hair removal cream	Veet	-	hair removal cream
Carbomer Eye Gel	Dr.GerhardMannChem-Pharm.FabrikGmbH	-	ophthalmic ointment