Ортопедические инъекции в молочной жира Pad: Создание рака молочной железы у мышей

Overview

В этой статье мы обсуждаем, как установить модель рака молочной железы у мышей женского пола путем введения раковых клеток молочной железы в молочной железы жира площадку. Пример протокола демонстрирует ортопедическую инъекцию.

Protocol

Эксперименты на животных проводились в соответствии с Положением и Общей рекомендацией китайского законодательства об экспериментальном управлении животными и были одобрены Комитетом по уходу за животными и использованию столичного медицинского университета (Ref no. AEEI-2014-052). Были использованы самки мышей Balb/c в возрасте от 6 до 8 недель.

1. Подготовка клеток и животных

1. За день до операции, брить волосы вокруг четвертых сосков подвергать операционной области.
   1. Используйте одну руку, чтобы крепко держать мышь за спиной, чтобы убедиться, что мышь не будет свободно двигаться, включите мышь, чтобы разоблачить ее живот оператору, а затем использовать другую руку, чтобы побрить мех вокруг четвертого соска с электронной бритвой.
   2. Положите тонкий слой крема для удаления волос вокруг сосков на 30 - 60 с, очистить крем с дистиллированной водой, а затем высушить мышь мягкой бумагой.
2. В день операции собирайте муриновые раковые клетки молочной железы (4T1-luc2), подсчитывайте количество клеток и настраивайте плотность клеток до 2^{х 10 5} клеток/мл в фосфатно-буферном солевом растворе (PBS) в стерильных микроцентрифугных трубках и держите их на льду. Для каждой мыши готовится 1^{х 10 4} ячейки/50 МКЛ в шприце 1 мл.

2. Ортопедическая инъекция

1. Анестезия мышей
   1. Индуцировать анестезию. Поместите мышей в закрытый прозрачный контейнер и включите 2% изофлюранового газа, чтобы обезболить мышей в течение 5 минут, пока все они не лягут и не заснут.
   2. Поддерживайте анестезию. Передача мышей из контейнера в отдельные маски анестезии, положить некоторые ветеринар мазь на их глазах, чтобы избежать сухости, держать мышей supinely с их соски подвергаются оператора, и пусть они продолжают вдыхать изофлюран газа в течение нескольких минут, пока инъекция была выполнена.
   3. Подтвердите успех анестезии отсутствием рефлекса снятия щипать.
   4. Нанесите офтальмологическую мазь на глаза мышей, чтобы предотвратить сухость глаз.
      ПРИМЕЧАНИЕ В зависимости от размера контейнера и количества отдельных анестезии маски доступны, группа мышей могут быть анестезированной вместе и вводили один за другим под индивидуальной анестезией.
2. Производительность инъекции
   1. Используйте одну руку, чтобы палатку кожу вокруг четвертого соска с пинцетом, чтобы создать поднятый "туннель" для шприца следовать. Используйте другую руку, чтобы держать шприц с иглой повернул вверх, чтобы войти в кожу подкожно на 5 - 10 мм от соска; Затем следуйте за «туннелем» до тех пор, пока кончик иглы не приблизит к соску, осторожно переместит кончик иглы вверх в молочную жировую площадку, пока глаз иглы не перейдет под кончик соска, не отбросит пинцет и не впрыснут клетки медленно.
   2. Поверните вокруг иглы немного и втягивать шприц медленно; использовать ватный тампон, чтобы нажать рану иглы для 10 - 20 с, чтобы убедиться, что нет жидкости просачивания.
   3. Наблюдайте четвертый сосок, чтобы подтвердить успешную инъекцию: одна белая прозрачная плоская сфера с соском, как центр можно наблюдать(рисунок 1).
3. Держите мышей анестезии в течение еще одной минуты, чтобы избежать позволяя мышам восстановиться и двигаться слишком быстро, что приведет к инъекционной раны, чтобы открыть и опухолевые клетки просачиваться.

Рисунок 1: Фотографии до и после ортопедической инъекции на молочной жировой площадке самки balb/c мышей. Операция была проведена, и фотографии были сделаны в то время как мыши были под изофлюран анестезией. A, перед инъекцией, B, после инъекции.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
anesthesia machine	Midmark Corporation, Dayton, OH, USA	Matrx VMS	anesthesia
isoflurane	Hebei yipin chemical reagents  company	O21400	anesthesia
1 mL syringe	Becton, Dickinson and  Company	A257	cell injection
hair removal cream	Veet	-	hair removal cream
Carbomer Eye Gel	Dr.GerhardMannChem-Pharm.FabrikGmbH	-	ophthalmic ointment