Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Encyclopedia of Experiments

Ortopedisk injektion i bröstfettdynan: Etablera bröstcancer hos möss

Overview

I den här artikeln diskuterar vi hur man etablerar en bröstcancermodell hos kvinnliga möss genom att injicera bröstcancerceller i bröstfettdynan. Exempelprotokollet visar den ortopiska injektionen.

Protocol

Djurförsök utfördes i enlighet med bestämmelsen och den allmänna rekommendationen i kinesisk lagstiftning om experimentell djuradministration och godkändes av Institutionen för djurvård och användningskommitté vid Capital Medical University (Ref nr. AEEI-2014-052). Kvinnliga Balb/c möss i åldern 6 till 8 veckor användes.

1. Beredning av celler och djur

  1. En dag före operationen rakar du håret runt de fjärde bröstvårtorna för att exponera operationsområdet.
    1. Använd en hand för att hålla musen tätt bak för att se till att musen inte rör sig fritt, vrid upp musen för att exponera magen för operatören och använd sedan en annan hand för att raka pälsen runt de fjärde bröstvårtorna med en elektronisk rakapparat.
    2. Lägg ett tunt lager hårborttagningskräm runt bröstvårtorna i 30-60 s, rengör grädden med destillerat vatten och torka sedan musen med mjukt papper.
  2. På operationsdagen samlar du in murin bröstcancerceller (4T1-luc2), räknar cellnumret och justerar celltätheten till 2 x 105 celler/ml i fosfatbuffrad saltlösning (PBS) i sterila mikrocentrifugrör och håller dem på is. För varje mus bereds 1 x10 4 celler/50 μL i en 1 ml spruta.

2. Ortopisk injektion

  1. Anestesi hos möss
    1. Framkalla anestesi. Lägg mössen i en sluten genomskinlig behållare och slå på 2% isoflurangas för att bedöva mössen i ca 5 min, tills de alla lägger sig ner och somnar.
    2. Behåll anestesin. Överför mössen från behållaren till individuella anestesimasker, sätt lite veterinärsalva på ögonen för att undvika torrhet, håll mössen supinely med bröstvårtorna exponerade för operatören och låt dem fortsätta att andas in isoflurangas i några minuter tills injektionen har utförts.
    3. Bekräfta framgången med anestesi genom bristen på en tå nypa tillbakadragande reflex.
    4. Applicera oftalmisk salva på mössens ögon för att förhindra ögontorrhet.
      ANMÄRKNING Enligt behållarens storlek och antalet individuella anestesimasker som finns tillgängliga kan en grupp möss bedövas tillsammans och injiceras en efter en under individuell anestesi.
  2. Injektionens prestanda
    1. Använd en hand för att tälta upp huden runt den fjärde bröstvårtan med pincett, för att sätta upp en upplyft "tunnel" för sprutan att följa. Använd den andra handen för att hålla sprutan med nålen vänd uppåt för att komma in i huden subkutant vid 5 - 10 mm från bröstvårtan; följ sedan "tunneln" tills nålspetsen kommer nära bröstvårtan, flytta försiktigt nålspetsen upp i bröstfettdynan tills nålögat kommer under bröstvårtspetsen, kassera pincetten och injicera cellerna långsamt.
    2. Vänd nålen lite och dra långsamt tillbaka sprutan; använd en bomullspinne för att trycka på nålsåret i 10-20 s för att se till att det inte finns någon vätskesippring.
    3. Observera den fjärde bröstvårtan för att bekräfta en lyckad injektion: en vit genomskinlig platt sfär med bröstvårtan eftersom mitten kan observeras (Bild 1).
  3. Håll mössen bedövade i ytterligare en minut för att undvika att låta mössen återhämta sig och röra sig för snabbt, vilket gör att injektionssåret öppnas och tumörcellerna läcker ut.

Figure 1
Figur 1: Bilder före och efter ortopinjektionen på bröstfettdynan hos honmöss. Operationen utfördes, och bilderna togs medan mössen var under isofluranbedövning. A, före injektion, B, efter injektion.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
anesthesia machine Midmark Corporation, Dayton, OH, USA Matrx VMS anesthesia
 isoflurane Hebei yipin chemical reagents  company O21400 anesthesia
1 mL syringe Becton, Dickinson and  Company A257 cell injection
hair removal cream Veet - hair removal cream
Carbomer Eye Gel Dr.GerhardMannChem-Pharm.FabrikGmbH - ophthalmic ointment

DOWNLOAD MATERIALS LIST

Tags

Tomt värde ärende
Ortopedisk injektion i bröstfettdynan: Etablera bröstcancer hos möss
Play Video
DOWNLOAD MATERIALS LIST

Källa: Zhang, G. L., et al. Ortopisk injektion av bröstcancerceller i mice mammary fett pad. J. Vis. Exp. (2019). 

View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter