Orthotopische Injektion in das Brustfettpad: Brustkrebs bei Mäusen

Overview

In diesem Artikel diskutieren wir, wie man ein Brustkrebsmodell bei weiblichen Mäusen etabliert, indem Brustkrebszellen in das Brustfettpad injiziert werden. Das Beispielprotokoll veranschaulicht die orthotopische Injektion.

Protocol

Tierversuche wurden in Übereinstimmung mit der Bestimmung und der allgemeinen Empfehlung der chinesischen Experimentellen Tierverwaltungsgesetzgebung durchgeführt und vom Institution of Animal Care and Use Committee der Capital Medical University (Ref. AEEI-2014-052). Es wurden weibliche Balb/c-Mäuse im Alter von 6 bis 8 Wochen verwendet.

1. Vorbereitung der Zellen und Tiere

1. Einen Tag vor der Operation rasieren Sie die Haare um die vierten Brustwarzen, um den Operationsbereich freizulegen.
   1. Verwenden Sie eine Hand, um die Maus fest an der Rückseite zu halten, um sicherzustellen, dass die Maus sich nicht frei bewegt, drehen Sie die Maus auf, um ihren Bauch dem Bediener auszusetzen, und verwenden Sie dann eine andere Hand, um das Fell um die vierten Brustwarzen mit einem elektronischen Rasierer zu rasieren.
   2. Legen Sie eine dünne Schicht Haarentfernungscreme um die Brustwarzen für 30 - 60 s, reinigen Sie die Creme mit destilliertem Wasser, und trocknen Sie dann die Maus mit weichem Papier.
2. Am Tag der Operation sammeln Sie murine Brustkrebszellen (4T1-luc2), zählen die Zellzahl und passen die Zelldichte auf 2 x 10⁵ Zellen/ml in phosphatgepufferter Saline (PBS) in sterilen Mikrozentrifugenröhren an und halten sie auf Eis. Für jede Maus werden 1 x 10⁴ Zellen/50 l in einer 1-ml-Spritze vorbereitet.

2. Orthotopische Injektion

1. Anästhesie von Mäusen
   1. Anästhesie induzieren. Legen Sie die Mäuse in einen geschlossenen transparenten Behälter und schalten Sie 2% Isoflurangas ein, um die Mäuse ca. 5 min zu befeuchten, bis sie sich alle hinlegen und einschlafen.
   2. Halten Sie anästhesie. Übertragen Sie die Mäuse aus dem Behälter auf einzelne Anästhesiemasken, legen Sie einige Tierarztsalbe auf ihre Augen, um Trockenheit zu vermeiden, halten Sie die Mäuse mit ihren Brustwarzen dem Bediener ausgesetzt, und lassen Sie sie weiterhin Isoflurangas für ein paar Minuten einatmen, bis die Injektion durchgeführt wurde.
   3. Bestätigen Sie den Erfolg der Anästhesie durch das Fehlen eines Zehen-Pinch-Entzugsreflexes.
   4. Tragen Sie die ophthalmologische Salbe auf die Augen der Mäuse auf, um Augentrockenheit zu verhindern.
      ANMERKUNG Je nach Behältergröße und Anzahl der verfügbaren einzelnen Anästhesiemasken kann eine Gruppe von Mäusen unter individueller Anästhesie einzeln anbeästheisiert und injiziert werden.
2. Leistung der Injektion
   1. Verwenden Sie eine Hand, um die Haut um die vierte Brustwarze mit einer Pinzette zu zelten, um einen erhöhten "Tunnel" für die Spritze zu bauen. Verwenden Sie die andere Hand, um die Spritze mit der nach oben gedrehten Nadel zu halten, um die Haut subkutan bei 5 - 10 mm von der Brustwarze zu betreten; Dann folgen Sie dem "Tunnel", bis die Nadelspitze nahe an die Brustwarze kommt, bewegen Sie vorsichtig die Nadelspitze in das Brustfettpad, bis das Nadelöhr unter die Brustwarzenspitze kommt, entsorgen Sie die Pinzette und injizieren Sie die Zellen langsam.
   2. Drehen Sie die Nadel ein wenig um und ziehen Sie die Spritze langsam zurück; Verwenden Sie einen Wattestäbchen, um die Nadelwunde für 10 - 20 s zu drücken, um sicherzustellen, dass es keine Flüssigkeitssickerung gibt.
   3. Beobachten Sie die vierte Brustwarze, um eine erfolgreiche Injektion zu bestätigen: eine weiße transparente flache Kugel mit der Brustwarze als Mitte kann beobachtet werden (Abbildung 1).
3. Halten Sie die Mäuse für eine weitere Minute beäskosiert, um zu vermeiden, dass sich die Mäuse erholen und sich zu schnell bewegen, was dazu führt, dass sich die Injektionswunde öffnet und die Tumorzellen auslaufen.

Abbildung 1: Bilder vor und nach der orthotopischen Injektion am Brustfettpad weiblicher Balb/c-Mäuse. Die Operation wurde durchgeführt, und die Bilder wurden gemacht, während die Mäuse unter isoflurane Anästhesie waren. A, vor der Injektion, B, nach der Injektion.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
anesthesia machine	Midmark Corporation, Dayton, OH, USA	Matrx VMS	anesthesia
isoflurane	Hebei yipin chemical reagents  company	O21400	anesthesia
1 mL syringe	Becton, Dickinson and  Company	A257	cell injection
hair removal cream	Veet	-	hair removal cream
Carbomer Eye Gel	Dr.GerhardMannChem-Pharm.FabrikGmbH	-	ophthalmic ointment