Voedingstest: Beoordeling van voedingsvoorkeuren in Drosophila melanogaster

Overview

Deze video beschrijft een voedingstest voor fruitvliegen waarbij gekleurd voedsel wordt gebruikt om de voeding te controleren en het effect dat toegevoegde verbindingen kunnen hebben op de voedingsactiviteit. Het voorbeeldprotocol test de effecten van verschillende hormoonontregelende chemicaliën (EDC).

Protocol

Dit protocol is een fragment uit Bovier et al., Methods to Test Endocrine Disruption in Drosophila melanogaster, J. Vis. Exp. (2019).

1. Voedertest

OPMERKING: Deze test wordt aanbevolen om te testen of de aanwezigheid van de geselecteerde EDC in het medium de voeding van vliegen kan beïnvloeden.

1. Doe 15 jonge vliegen in flacons met maïsmeelmedium (CM) aangevuld met verschillende concentraties van de geselecteerde EDC en een kleurstof. Laat vliegen zich 1 dag voeden met de media.
   OPMERKING: Gebruik bijvoorbeeld rode kleurstof nr. 40 (1 mg/ml).
2. Doe 15 jonge vliegen in flacons met CM aangevuld met alleen het oplosmiddel en een kleurstof voor controle. Laat vliegen zich 1 dag voeden met de media.
3. Verdoof individueel elke groep vliegen met ether.
   1. Breng vliegen van elke groep over in een cilindrische glazen container (etherizer) met een trechter in het open uiteinde, draai de flacon om over de trechter en tik zachtjes op de twee containers samen om de vliegen in de etherizer te laten vallen.
      OPMERKING: De trechter voorkomt dat ze uit de etherizer komen.
   2. Sla vliegen neer door zachtjes op de etherizer te tikken op een zacht oppervlak, zoals een muismat, en vervang de trechter snel door een met ether doordrenkte katoenen en gaasplug.
   3. Wacht ongeveer 1 minuut tot de vliegen naar de bodem vallen en stoppen met bewegen.
      OPMERKING: Overschrijd de tijd niet, anders zullen de vliegen sterven.
4. Plaats geïmmobiliseerde vliegen onder een stereomicroscoop en vergelijk de buikkleuring van elke behandelingsgroep met betrekking tot de controlegroep.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
17α-Ethinylestradiol	Sigma	E4876-1G
Agar for Drosophila medium	BIOSIGMA	789148
Bisphenol A	Sigma	239658-50G
Bisphenol AF	Sigma	90477-100MG
Cornmeal	CA' BIANCA
Diethyl ether	Sigma
Drosophila Vials	BIOSIGMA	789008	25 mm x 95 mm
Drosophila Vials	BIOSIGMA	789009	29 mm x 95 mm
Drosophila Vials	Kaltek	187	22 mm x 63 mm
Ethanol	FLUKA	2860
Etherizer	Crafts		cylindrical glass container with a cotton plug
Hand blender Pimmy	Ariete		food processor
Instant Success yeast	ESKA		Powdered yeast
Red dye no. 40	SIGMA	16035
Stereomicroscope with LED lights	Leica		S4E