Overview
このビデオでは、着色食品が給餌を監視するために使用され、添加された化合物が摂食活性に及ぼす影響を示すフルーツハエの摂食アッセイについて説明します。このプロトコル例は、いくつかの内分泌破壊化学物質(EDC)の影響をテストします。
Protocol
このプロトコルは、ショウジョウバエメラノガスター、J.Vis.Exp.(2019)における内分泌破壊を試験する方法、Bovierらからの抜粋である。
1. 給餌アッセイ
注: このアッセイは、選択されたEDCが媒体内に存在することがハエの摂食に影響を及ぼす可能性があるかどうかをテストするために推奨される。
- 選択したEDCと着色食品の異なる濃度を補ったコーンミール培地(CM)を含むバイアルに15個の若いハエを入れます。ハエが1日間メディアを食べられるようにします。
注: 例えば、赤色染料第40(1mg/mL)を使用します。 - CMを含むバイアルに15個の若いハエを溶媒だけで補い、着色食品を入れてコントロールします。ハエが1日間メディアを食べられるようにします。
- エテルでハエの各グループを個別に麻酔します。
- 各グループのハエを開いた端に漏斗を挿入した円筒形ガラス容器(エータライザー)に移し、漏斗の上にバイアルを反転させ、2つの容器を穏やかにタップしてエタライザーに落ちるようにします。
注: 漏斗は、彼らがエーテルライザーから抜け出すのを防ぎます。 - マウスパッドなどの柔らかい表面でエータライザーを軽くタップして飛び降り、すぐにエテル浸しの綿とガーゼプラグで漏斗を置き換えます。
- ハエが底に落ちて動かなくなるまで約1分待ちます。
注: 時間を超えないか、ハエが死ぬ。
- 各グループのハエを開いた端に漏斗を挿入した円筒形ガラス容器(エータライザー)に移し、漏斗の上にバイアルを反転させ、2つの容器を穏やかにタップしてエタライザーに落ちるようにします。
- 固定化ハエをステレオ顕微鏡下に置き、各治療群の腹部着色を対照群に対して比較する。
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Materials
Name | Company | Catalog Number | Comments |
17α-Ethinylestradiol | Sigma | E4876-1G | |
Agar for Drosophila medium | BIOSIGMA | 789148 | |
Bisphenol A | Sigma | 239658-50G | |
Bisphenol AF | Sigma | 90477-100MG | |
Cornmeal | CA' BIANCA | ||
Diethyl ether | Sigma | ||
Drosophila Vials | BIOSIGMA | 789008 | 25 mm x 95 mm |
Drosophila Vials | BIOSIGMA | 789009 | 29 mm x 95 mm |
Drosophila Vials | Kaltek | 187 | 22 mm x 63 mm |
Ethanol | FLUKA | 2860 | |
Etherizer | Crafts | cylindrical glass container with a cotton plug | |
Hand blender Pimmy | Ariete | food processor | |
Instant Success yeast | ESKA | Powdered yeast | |
Red dye no. 40 | SIGMA | 16035 | |
Stereomicroscope with LED lights | Leica | S4E |