摂食試験:ショウジョウバエメラノガスターにおける摂食の嗜好評価

Overview

このビデオでは、着色食品が給餌を監視するために使用され、添加された化合物が摂食活性に及ぼす影響を示すフルーツハエの摂食アッセイについて説明します。このプロトコル例は、いくつかの内分泌破壊化学物質(EDC)の影響をテストします。

Protocol

このプロトコルは、ショウジョウバエメラノガスター、J.Vis.Exp.(2019)における内分泌破壊を試験する方法、Bovierらからの抜粋である。 

1. 給餌アッセイ

注: このアッセイは、選択されたEDCが媒体内に存在することがハエの摂食に影響を及ぼす可能性があるかどうかをテストするために推奨される。

1. 選択したEDCと着色食品の異なる濃度を補ったコーンミール培地(CM)を含むバイアルに15個の若いハエを入れます。ハエが1日間メディアを食べられるようにします。
   注: 例えば、赤色染料第40(1mg/mL)を使用します。
2. CMを含むバイアルに15個の若いハエを溶媒だけで補い、着色食品を入れてコントロールします。ハエが1日間メディアを食べられるようにします。
3. エテルでハエの各グループを個別に麻酔します。
   1. 各グループのハエを開いた端に漏斗を挿入した円筒形ガラス容器(エータライザー)に移し、漏斗の上にバイアルを反転させ、2つの容器を穏やかにタップしてエタライザーに落ちるようにします。
      注: 漏斗は、彼らがエーテルライザーから抜け出すのを防ぎます。
   2. マウスパッドなどの柔らかい表面でエータライザーを軽くタップして飛び降り、すぐにエテル浸しの綿とガーゼプラグで漏斗を置き換えます。
   3. ハエが底に落ちて動かなくなるまで約1分待ちます。
      注: 時間を超えないか、ハエが死ぬ。
4. 固定化ハエをステレオ顕微鏡下に置き、各治療群の腹部着色を対照群に対して比較する。

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
17α-Ethinylestradiol	Sigma	E4876-1G
Agar for Drosophila medium	BIOSIGMA	789148
Bisphenol A	Sigma	239658-50G
Bisphenol AF	Sigma	90477-100MG
Cornmeal	CA' BIANCA
Diethyl ether	Sigma
Drosophila Vials	BIOSIGMA	789008	25 mm x 95 mm
Drosophila Vials	BIOSIGMA	789009	29 mm x 95 mm
Drosophila Vials	Kaltek	187	22 mm x 63 mm
Ethanol	FLUKA	2860
Etherizer	Crafts		cylindrical glass container with a cotton plug
Hand blender Pimmy	Ariete		food processor
Instant Success yeast	ESKA		Powdered yeast
Red dye no. 40	SIGMA	16035
Stereomicroscope with LED lights	Leica		S4E