Overview
Denna video beskriver en utfodringsanalys för fruktflugor där färgad mat används för att övervaka utfodring och den effekt som tillsatta föreningar kan ha på utfodringsaktiviteten. Exempelprotokollet testar effekterna av flera hormonstörande kemikalier (EDC).
Protocol
Detta protokoll är ett utdrag från Bovier et al., Metoder för att testa endokrina störningar i Drosophila melanogaster, J. Vis. Exp. (2019).
1. Foderanalys
OBS: Denna analys rekommenderas att testa om förekomsten av den valda EDC i mediet kan påverka utfodring av flugor.
- Sätt 15 unga flugor i flaskor som innehåller majsmjölsmedium (CM) kompletterat med olika koncentrationer av den valda EDC och en färgmat. Låt flugor mata på media i 1 dag.
OBS: Använd till exempel rött färgämne nr 40 (1 mg/ml). - Sätt 15 unga flugor i injektionsflaska som innehåller CM kompletterat med lösningsmedlet ensamt och en färgmat för kontroll. Låt flugor mata på media i 1 dag.
- Bedöva individuellt varje grupp flugor med eter.
- Överför flugor av varje grupp till en cylindrisk glasbehållare (etherizer) med en tratt insatt i den öppna änden, vänd injektionsflaskan över tratten och knacka försiktigt de två behållarna tillsammans för att få flugorna att falla i eterizern.
OBS: Tratten hindrar dem från att komma ut ur eterizern. - Knock flyger ner genom att försiktigt knacka etherizern på en mjuk yta, till exempel en musmatta, och snabbt ersätta tratten med en eter-blöt bomull och gasvävsplugg.
- Vänta ca 1 min tills flugorna faller till botten och sluta röra sig.
OBS: Överskrid inte tiden, annars dör flugorna.
- Överför flugor av varje grupp till en cylindrisk glasbehållare (etherizer) med en tratt insatt i den öppna änden, vänd injektionsflaskan över tratten och knacka försiktigt de två behållarna tillsammans för att få flugorna att falla i eterizern.
- Sätt immobiliserade flugor under ett stereomikroskop och jämför bukfärgningen för varje behandlingsgrupp med avseende på kontrollgruppen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 17α-Ethinylestradiol | Sigma | E4876-1G | |
| Agar for Drosophila medium | BIOSIGMA | 789148 | |
| Bisphenol A | Sigma | 239658-50G | |
| Bisphenol AF | Sigma | 90477-100MG | |
| Cornmeal | CA' BIANCA | ||
| Diethyl ether | Sigma | ||
| Drosophila Vials | BIOSIGMA | 789008 | 25 mm x 95 mm |
| Drosophila Vials | BIOSIGMA | 789009 | 29 mm x 95 mm |
| Drosophila Vials | Kaltek | 187 | 22 mm x 63 mm |
| Ethanol | FLUKA | 2860 | |
| Etherizer | Crafts | cylindrical glass container with a cotton plug | |
| Hand blender Pimmy | Ariete | food processor | |
| Instant Success yeast | ESKA | Powdered yeast | |
| Red dye no. 40 | SIGMA | 16035 | |
| Stereomicroscope with LED lights | Leica | S4E |
