Overview
यह वीडियो स्वाद वरीयता परख का वर्णन करता है, एक व्यवहार विधि जिसका उपयोग रंगीन समाधानों के प्रति आकर्षण या परिहार को मापने के लिए किया जाता है जो पसंदीदा पदार्थ के घूस के बाद फ्लाई के पेट के रंग का आकलन करके अलग स्वाद लेता है। विशेष रुप से प्रदर्शित प्रोटोकॉल अलग-अलग सुक्रोज सांद्रता के समाधानों के प्रति मक्खियों की वरीयता को मापने के लिए उपयोग की जाने वाली प्रक्रिया को दर्शाता है।
Protocol
यह प्रोटोकॉल बैनटेल और टेसियर, वयस्क ड्रोसोफिला, जे विस एक्सप्रेस (2016) के लिए स्वाद वरीयता परख का एक अंश है।
1. भुखमरी
- एक मानक मक्खी शीशी के तल पर 18.2 MΩ पानी के साथ एक कपास की गेंद संतृप्त द्वारा मक्खी भुखमरी शीशियों तैयार करें। वैकल्पिक रूप से, इसी तरह 18.2 MΩ पानी के साथ फिल्टर पेपर की एक छोटी पट्टी तर और शीशी के भीतर एक कोण पर जगह है।
- एक सीओ2 पैड पर ~ 100 जानवरों के सेट में मक्खियों को इकट्ठा करें और फिर मक्खियों को एक तैयार शीशी में जोड़ें।
नोट: सबसे अच्छा परिणाम उन जानवरों के साथ प्राप्त किए जाते हैं जो 5 दिन से कम पुराने होते हैं। हालांकि, जानवरों की सही उम्र को समय के साथ स्वाद वरीयता में परिवर्तन निर्धारित करने के लिए एक प्रयोगात्मक चर के रूप में नियंत्रित किया जा सकता है। - बंद शीशियों को सुरक्षित करने के लिए कपास की गेंद या फोम डाट का उपयोग करें। पर्यावरण नियंत्रित इनक्यूबेटर में उनके पक्ष में शीशियों को रखें। तापमान को 25 डिग्री सेल्सियस पर बनाए रखें, और आर्द्रता 70% से ऊपर। 24 घंटे के लिए अछूता शीशियों छोड़ दें ।
2. स्वाद वरीयता परख
- परीक्षण के रूप में एक ही दिन परख के लिए सभी टैंट तैयार करें।
नोट: उपयोग किए जाने वाले सटीक टैंट प्रयोगात्मक प्रश्न के आधार पर भिन्न होंगे। निम्नलिखित उदाहरण इस प्रोटोकॉल में उपयोग किए जाने वाले टैंट हैं। ऑप्टिमाइज़ेशन के लिए सेक्शन 4 देखें।- 100 एमएम सुक्रोज सॉल्यूशन के 10 माइक्रोन, रेड फूड कलरिंग के 13 माइक्रोन और 18.2 एमω पानी के 977 माइक्रोन को मिलाकर कंट्रोल टैस्टेंट (1 एमएम सुक्रोज) तैयार करें।
- 100 एमएम सुक्रोज सॉल्यूशन के 50 माइक्रोन, 10 माइक्रोन ब्लू फूड कलरिंग और 18.2 एमω पानी के 940 माइक्रोन को मिलाकर एक्सपेरिमेंटल टैस्टेंट (5 एमएम सुक्रोज) तैयार करें।
- निम्नलिखित तरीके से तैयार मानक 100 मिमी x 15 मिमी प्लास्टिक पेट्री डिश का उपयोग करके परख कक्ष बनाएं:
- 12 बजे प्लेट के किनारे के पास नियंत्रण की तीन 10 माइक्रोन बूंदें रखें और 6 बजे एक और 3 बूंदें। सुनिश्चित करें कि बूंदों के बीच की रिक्ति समान है।
- 3 बजे थाली के किनारे के पास प्रयोगात्मक टैसेंट की तीन 10 माइक्रोन बूंदें रखें और 9 बजे एक और 3 बूंदें । सुनिश्चित करें कि बूंदों के बीच की रिक्ति समान है।
- जितने चाहें उतने प्रतिकृति के लिए चरण 2.2.1 और 2.2.2 दोहराएं।
- ~ 100 भूखे की खाली 1 शीशी एक सीओ 2 पैड पर मक्खियों बसलंबे समय के लिए सभी जानवरों (लगभग 10 सेकंड) को एनेस्थेटाइज करने के लिए पर्याप्त है। जानवरों को एक तैयार परख कक्ष के बीच में ब्रश करें और पकवान ढक्कन के साथ कवर करें।
नोट: सीओ2 एक्सपोजर की लंबी अवधि के लिए वसूली समय में सुधार और खिला व्यवहार के साथ हस्तक्षेप की सीमा से बचा जाना चाहिए । बर्फ के संपर्क में (~ 5 मिनट) का उपयोग सीओ2 व्यवहार प्रभावों से बचने के लिए एनेस्थेटाइजिंग के लिए किया जा सकता है जो सीमित एक्सपोजर से भी उत्पन्न हो सकते हैं। - परख कक्ष को एक अपारदर्शी गत्ते के बक्से में रखें। बॉक्स के बाहर की स्थिति और जीनोटाइप का परीक्षण किया जा रहा है के साथ लेबल करने के लिए सुनिश्चित करें ।
- पूरे सेटअप (परख कक्ष चरण 2.4 से गत्ता बॉक्स के भीतर निहित) 2 घंटे के लिए कम से कम 70% आर्द्रता के साथ 25 डिग्री सेल्सियस इनक्यूबेटर में रखें।
- सभी प्रतिकृति के लिए 2.5 के माध्यम से 2.3 चरणों को दोहराएं।
- 2 घंटे के बाद, परख कक्षों को रखें, जो अभी भी कार्डबोर्ड बक्से के भीतर निहित है, सीधे -20 डिग्री सेल्सियस फ्रीजर में जब तक क्वांटिटेशन के लिए तैयार नहीं हो जाता है।
3. स्वाद वरीयता परख मात्रा
- कमरे के तापमान (लगभग 5 मिनट) तक गर्म करने के लिए एक परख कक्ष की अनुमति दें।
- एक विच्छेदन माइक्रोस्कोप के तहत, ब्रश या संदंश की जोड़ी का उपयोग करके, उनके पेट के रंग के आधार पर समूह जानवर: लाल, नीला, बैंगनी या स्पष्ट(चित्रा 1)।
- प्रत्येक समूह में जानवरों की संख्या रिकॉर्ड करें। स्पष्ट जानवरों पर विचार करने के लिए परख में भाग नहीं लिया है और इसलिए उन्हें किसी भी गणना में शामिल नहीं है।
- निम्नलिखित समीकरणों में से एक के अनुसार वरीयता सूचकांक की गणना करें:
- यदि ब्याज के प्रयोगात्मक टैस्टेंट को लाल रंग में जोड़ा जाता है, तो उपयोग करें (एनलाल + 0.5Nबैंगनी)/(एनलाल + एनब्लू + एनबैंगनी)।
- यदि प्रयोगात्मक टैस्टेंट को नीले रंग में जोड़ा जाता है, तो समीकरण को समायोजित करें (एनब्लू + 0.5Nबैंगनी)/(एनब्लू + एनलाल + एनबैंगनी)।
- सभी प्रयोगात्मक स्थितियों के लिए गणना दोहराएं और प्रतिकृति।
4. स्वाद वरीयता परख का अनुकूलन
- अनुभवजन्य रूप से खाद्य रंग संकेतकों की एकाग्रता का उपयोग किया जाना है ताकि खाद्य रंग स्वाद परख के परिणाम को प्रभावित न करे, जैसा कि इस प्रकार है:
- एक ही बेस कंपाउंड(जैसे 5 एमएम सुक्रोज) का उपयोग करके 4 टैक्ट्स तैयार करें जैसा कि चरण 2.1 में इंगित किया गया है, लेकिन भोजन के रंग को छोड़ दें।
- एक टैस्टेंट में से 1.3% लाल भोजन रंग जोड़ें। प्रत्येक ट्यूब में अलग-अलग सांद्रता के नीले भोजन के रंग के साथ शेष 3 टैस्टेंट बनाएं(उदाहरण के लिए 0.6%, 1%, और 1.3%)।
- प्रत्येक टैस्टेंट जोड़ी के लिए 3.4 के माध्यम से 2.2 प्रोटोकॉल चरण पूरा करें: 1.3% लाल बनाम 0.6% नीला; 1.3% लाल बनाम 1% नीला और 1.3% लाल बनाम 1.3% नीला।
- जब तक वरीयता सूचकांक 0 (चित्रा 2) का मूल्य औसत नहीं होता, तब तक नीले भोजन के रंग के विभिन्न प्रतिशतों के साथ दोहराएं चरण4.1.1-4.1.3।
नोट: एक प्रारंभिक बिंदु के रूप में, 1.3% लाल भोजन रंग 1% नीले भोजन रंग के साथ मिलकर आम तौर पर अच्छे परिणाम देता है। यदि नीले भोजन के रंग की कोई संतोषजनक एकाग्रता 1.3% डाई से मेल नहीं खा सकती है, तो 4.1.1 से 4.1.3 चरण लाल रंग की अलग-अलग सांद्रता और नीले भोजन के रंग की निरंतर एकाग्रता के साथ दोहराया जा सकता है। - एक ही अनुकूलित खाद्य रंग सांद्रता के साथ परीक्षण करने के लिए सभी शर्तों का विश्लेषण करें।
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Representative Results
चित्रा 1: स्वाद वरीयता परख परिणाम। पेट के रंग की भिन्नता में कुछ उदाहरण दिखाए गए हैं। गहरे लाल रंग(ए)। हल्का लाल रंग(B)। गहरे नीले रंग का निगला(ग)। हल्का नीला(डी)। बैंगनी पेट माना जाता है जब पूरे रंग बैंगनी(ई)दिखाई देता है, या जब पेट के अलग क्षेत्रों लाल (तीर) और नीले (तीर)(एफ)के अलग भागों के कुछ हिस्सों को दिखाने के लिए । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।
चित्रा 2: खाद्य रंगाई प्रभाव के लिए नियंत्रित करना। टैंट्स में भोजन रंग के अलावा जानवरों के स्वाद वरीयता पर कोई प्रभाव नहीं होना चाहिए। लाल रंग की निरंतर एकाग्रता बनाए रखते हुए नीले रंग की एकाग्रता को अलग करने से 1.3% लाल से 1.0% नीले रंग का इष्टतम संयोजन पता चला। यह 0.5 के पास एक वरीयता सूचकांक मूल्य द्वारा इंगित किया जाता है। मान मानक विचलन ± मतलब है । * पी एंड एलटी; 0.05, ***पी एंड एलटी; 0.001 दो तरफा छात्र के टी-टेस्ट से। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।
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Materials
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Blue Food Coloring (Water, Propylene Glycol, FD&C Blue 1 and Red 40, Propylparaben) | McCormick | N/A | |
Cryo/Freezer Boxes w/o Dividers | Fisher | 03-395-455 | |
Dumont #5 Forceps | Fine Science Tools | 11251-20 | |
Leica S6 E Stereozoom 0.63X-4.0X microscope | W. Nuhsbaum, Inc. | 10446294 | |
Petri dish (100 mm x 15 mm) | BD Falcon | 351029 | Reuseable if thoroughly washed and dried |
Quick-Snap Microtubes | Alkali Scientific Inc. | C3017 | |
Red Food Coloring (Water, Propylene Glycol, FD&C Reds 40 and 3, Propylparaben) | McCormick | N/A | |
Sucrose | IBI Scientific | IB37160 |