Overview
Denne video beskriver, hvordan man sporer fritgående fluer for at vurdere deres generelle bevægelsesevne. Den fremhævede protokol demonstrerer analysens opsætning og dataanalyse ved hjælp af videosporingssoftware.
Protocol
Denne protokol er et uddrag fra Sun og Chen, en ny metode til model kronisk traumatisk encephalopati i Drosophila, J. Vis. Exp. (2017).
1. Videoassisteret bevægelsessporing
- Fyld en petriskål med en diameter på 6 cm med gennemsigtig siliciumelastomer for at gøre sporingsarenaen. Efterlad en plads på 3 mm mellem silicium og skållåget, så fluerne kan gå frit, men ikke flyve.
- Bedøve fire fluer fra enten fingeret eller behandlet gruppe hver gang og placere dem i arenaen. Lad fluerne stå ved 22 °C i 1 time.
- Placer et CCD-kamera (Charge-Coupled Device) over arenaerne, og optag i 5 min.
- Analyser de registrerede bevægelsesbaner ved hjælp af Ctrax-software (frit tilgængelig fra Caltech). Eksporter de sporede data i et programmeringssprog (f.eks. Matlab)-kompatibelt format, og analyser dataene baseret på den tilbagelagte afstand pr. ramme. Beregn den gennemsnitlige gåafstand for hver flue, og kombiner den med alle andre registrerede fluer/gruppe for at opnå en gennemsnitlig kumulativ afstand, som lokalbefolkningen af filer i samme gruppe har tilbagelagt.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
Name | Company | Catalog Number | Comments |
60 mm Petri Dishes | Fisher Scientific | FB0875713A | Used as a tracking arenas |
Flow Regulator | Genesee Scientific | 59-122WC | |
Fine Brush | Genesee Scientific | 59-204 | |
Flypad | Genesee Scientific | 59-114 | |
Sylgard Silicone Elastomer | Dow Corning | 4019862 | |
CCD Camera | Microsoft | HD-5000 | |
Ctrax Walking Fly Tracker | Caltech | Ctrax 0.2.11 | |
MATLAB Image Processing Toolbox | MATLAB | R2015b |