Overview
Denne videoen beskriver hvordan du sporer fritt vandrende fluer for å vurdere deres generelle bevegelsesevne. Den omtalte protokollen demonstrerer analysens oppsett og dataanalyse ved hjelp av videosporingsprogramvare.
Protocol
Denne protokollen er et utdrag fra Sun and Chen, en ny metode for å modellere kronisk traumatisk encefalopati i Drosophila, J. Vis. Exp. (2017).
1. Videoassistert bevegelsessporing
- Fyll en Petri-tallerken med en diameter på 6 cm med gjennomsiktig silisiumelastomer for å lage sporingsarenaen. La det være et 3 mm mellomrom mellom silisiumet og parabollokket slik at fluene kan gå fritt, men ikke fly.
- Bedøv fire fluer fra enten sham eller behandlet gruppe hver gang og plasser dem i arenaen. La fluene stå på 22 °C i 1 time.
- Plasser et CCD-kamera (Charge-Coupled Device) over arenaene og ta opp i 5 minutter.
- Analyser de innspilte bevegelsesbanene ved hjelp av Ctrax-programvare (fritt tilgjengelig fra Caltech). Eksporter de sporede dataene i et programmeringsspråk (f.eks. Matlab)-kompatibelt format og analyser dataene basert på tilbakelagt avstand per ramme. Beregn gjennomsnittlig gangavstand for hver flue og kombiner den med alle andre registrerte fluer / grupper for å få en gjennomsnittlig kumulativ avstand reist av befolkningen av filer i samme gruppe.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 60 mm Petri Dishes | Fisher Scientific | FB0875713A | Used as a tracking arenas |
| Flow Regulator | Genesee Scientific | 59-122WC | |
| Fine Brush | Genesee Scientific | 59-204 | |
| Flypad | Genesee Scientific | 59-114 | |
| Sylgard Silicone Elastomer | Dow Corning | 4019862 | |
| CCD Camera | Microsoft | HD-5000 | |
| Ctrax Walking Fly Tracker | Caltech | Ctrax 0.2.11 | |
| MATLAB Image Processing Toolbox | MATLAB | R2015b |
