Overview
Este video describe cómo rastrear moscas caminando libremente para evaluar su capacidad general de locomoción. El protocolo destacado muestra la configuración y el análisis de datos del ensayo mediante el software de seguimiento de vídeo.
Protocol
Este protocolo es un extracto de Sun and Chen, A Novel Method to Model Chronic Traumatic Encephalopathy in Drosophila, J. Vis. Exp. (2017).
1. Seguimiento de movimiento asistido por video
- Llene una placa Petri de 6 cm de diámetro con elastómero de silicio transparente para hacer la arena de seguimiento. Deje un espacio de 3 mm entre el silicio y la tapa del plato para permitir que las moscas caminen libremente pero no vuelen.
- Anestesia cuatro moscas del grupo de la farsa o tratadas cada vez y colócalas en la arena. Deje las moscas a 22 °C durante 1 h.
- Coloque una cámara de dispositivo acoplado a carga (CCD) por encima de las arenas y grabe durante 5 minutos.
- Analice las trayectorias de movimiento grabadas utilizando el software Ctrax (disponible libremente en Caltech). Exporte los datos rastreados en un formato compatible con el lenguaje de programación (por ejemplo, Matlab) y analice los datos en función de la distancia recorrida por fotograma. Calcule la distancia media a pie para cada mosca y combínala con todas las demás moscas/grupo registrados para obtener una distancia acumulada media recorrida por la población de archivos en el mismo grupo.
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 60 mm Petri Dishes | Fisher Scientific | FB0875713A | Used as a tracking arenas |
| Flow Regulator | Genesee Scientific | 59-122WC | |
| Fine Brush | Genesee Scientific | 59-204 | |
| Flypad | Genesee Scientific | 59-114 | |
| Sylgard Silicone Elastomer | Dow Corning | 4019862 | |
| CCD Camera | Microsoft | HD-5000 | |
| Ctrax Walking Fly Tracker | Caltech | Ctrax 0.2.11 | |
| MATLAB Image Processing Toolbox | MATLAB | R2015b |
