तैराकी-प्रेरित पक्षाघात (SWIP) परख: सी एलिगेंस में डोपामाइन-मध्यस्थता लोकोमोशन की मात्रा निर्धारित करने के लिए एक विधि

Overview

यहां, हम SWIP को मापने के लिए एक परख पेश करते हैं, सी एलिगेंस का एक व्यवहार फेनोटाइप जो तैराकी जैसी जोरदार गति के दौरान होता है।  उदाहरण प्रोटोकॉल मैनुअल और स्वचालित विश्लेषण दोनों दृष्टिकोणों पर चर्चा करता है।

Protocol

निम्नलिखित प्रोटोकॉल कुदुमाला एट अल,तैराकी प्रेरित पक्षाघात से एक अंश हैजो कैनोरहैब्डिटिस एलिगेंस,जे विस एक्सप्रेस (2019) में डोपामाइन सिग्नलिंग का आकलन करने के लिए प्रेरित पक्षाघात है। 

SWIP

नोट: हम AMPH के साथ इलाज जंगली प्रकार के कीड़े में SWIP का आकलन करने की मैनुअल विधि का वर्णन करते हैं । हम एक स्वचालित कृमि ट्रैकर और एक ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर का उपयोग करके कीड़े की ट्रैकिंग और कृमि काइनेटिक्स के आगे विश्लेषण पर भी संक्षेप में चर्चा करते हैं जिन्हें पहले हार्डअवे एट अल द्वारा वर्णित किया गया था।

1. SWIP के लिए परीक्षण करने के लिए मैनुअल विधि
   1. अलीकोट 40 μL के साथ या 0.5 m AMPH के बिना एक गिलास स्पॉट प्लेट में 200 mOsm/L सुक्रोज समाधान। स्टीरियोस्कोप के तहत, एक बरौनी या प्लेटिनम लेने के साथ 8-10 देर से L4 चरण कीड़े उठाओ और समाधान युक्त थाली में लेने जलमग्न जब तक कीड़े लेने से कदम और समाधान में तैरना । कुएं में चुने गए कीड़े की संख्या पर ध्यान दें, टाइमर शुरू करें, प्रत्येक मिनट के निशान पर SWIP प्रदर्शित करने वाले कीड़े की संख्या का निरीक्षण करें और रिकॉर्ड करें।
   2. कच्चे डेटा को स्प्रेडशीट में कॉपी करें और परख में परीक्षण किए गए कीड़े की कुल संख्या से प्रत्येक मिनट में लकवाग्रस्त कीड़े की संख्या को विभाजित करके लकवाग्रस्त कीड़े के प्रतिशत की गणना करें और 100 से गुणा करें। किसी भी रेखांकन और सांख्यिकीय सॉफ्टवेयर में प्रतिशत मूल्यों की नकल करें और XY ग्राफ प्रारूप का उपयोग करके वाई एक्सिस और एक्स एक्सिस पर समय पर प्रतिशत मूल्यों के साथ डेटा को प्लॉट करें।
   3. नियंत्रण, AMPH समूहों और उपचार के समय के बीच सांख्यिकीय महत्व के लिए परीक्षण करने के लिए पोस्ट-हॉक विश्लेषण (जैसे, बोनफेरोनी पोस्ट-टेस्ट) के बाद दो तरह के ANOVA प्रदर्शन करें।
2. SWIP का स्वचालित विश्लेषण
   1. एक समय में एक ही कीड़े पर स्वचालित विश्लेषण करें। कैमरा स्थापित करने के लिए प्रोटोकॉल, कीड़ा ट्रैकर सॉफ्टवेयर और स्क्रिप्ट ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर विश्लेषण चलाने के लिए हरदूर एट अलमें विस्तार से वर्णित हैं ।
   2. संक्षेप में, धारा 1.1.2 में मैनुअल विधि में वर्णित एक बरौनी पिक का उपयोग करते हुए एक ग्लास स्पॉट प्लेट में एक देर से एल 4 चरण हर्मेफ्रोडिट रखें। समय पर एक कीड़े के स्विमिंग वीडियो रिकॉर्ड करें और शरीर के झुकता की आवृत्ति की गणना करने के लिए कीड़ा ट्रैकर सॉफ्टवेयर का उपयोग करें।
   3. कीड़ा पिटाई आवृत्ति प्राप्त करने के लिए और कीड़ा पिटाई डेटा से गर्मी नक्शे उत्पन्न करने के लिए ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर के साथ प्रदान की स्क्रिप्ट का पालन करें।

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Amphetamine	Sigma	51-63-8
Depression glass spot plate	Corning	Corning, Inc. 722085
Eye lash
Graphing and statistical software	Prism		Graphpad 5
Osmometer	Advanced Instruments, Inc	Model 3320
Spreadsheet	MS office		Microsoft Excel
Stereo Microscope	Zeiss	Model tlb3. 1 stemi2000
Sucrose	Sigma-Aldrich	RB=S5016
Superglue	Loctite	1647358 .14 oz.
SwimR sofware	10.18129/B9.bioc.SwimR
Tracker 2	Worm Tracker 2.0	www.mrc-lmb.cam.ac.uk/wormtracker/
Video recording software	Virtualdub	http://www.virtualdub.org/