Плавание индуцированных паралич (SWIP) Анализ: Метод количественно допамина опосредованное движение в C. elegans

Overview

Здесь мы вводим анализ для измерения SWIP, поведенческий фенотип C. elegans, который происходит во время энергичного движения, как плавание.  В примерном протоколе рассматриваются как ручные, так и автоматизированные подходы к анализу.

Protocol

Следующий протокол является выдержка из Kudumala и др.,Плавание индуцированного паралича для оценки допаминасигнализации в Caenorhabditis elegans, J. Vis. Exp. (2019). 

SWIP

ПРИМЕЧАНИЕ: Мы описываем ручной метод оценки SWIP у червей дикого типа, обработанных AMPH. Мы также кратко обсудить отслеживание червей и дальнейший анализ червя кинетики с помощью автоматизированного трекера червя и отслеживания программного обеспечения, которые ранее были описаны Hardaway и др.

1. Ручной метод для тестирования для SWIP
   1. Aliquot 40 л раствора сахарозы 200 mOsm/L либо с 0,5 мММ AMPH, либо без него в стеклянную тарелку. Под стереоскопом, выбрать 8-10 конце-L4 этапе червей с ресницами или платины забрать и погрузить забрать в пластине, содержащей раствор, пока черви сойти забрать и плавать в раствор. Обратите внимание на количество червей, выбранных в колодец, запустите таймер, наблюдайте и записывьте количество червей, выставляют SWIP на каждой минуте знака.
   2. Скопируйте необработанные данные в электронную таблицу и вычислите процент червей, парализованных, разделив количество червей, парализованных каждую минуту, на общее количество червей, протестированных на протяжении всего анализа, и умножьте на 100. Копировать процентные значения в любое графинг и статистическое программное обеспечение и построения данных с процентными значениями на оси Y и времени на оси X с помощью формата графика XY.
   3. Выполните двухгодовый ANOVA с последующим пост-специальным анализом (например, Bonferroni post-test) для проверки статистической значимости между контрольом, группами AMPH и временем лечения.
2. Автоматизированный анализ SWIP
   1. Выполняя автоматизированный анализ на одном черве за один раз. Протокол для настройки камеры, программного обеспечения трекера червя и скрипт для запуска анализа программного обеспечения отслеживания подробно описаны в Hardaway et al.
   2. Короче говоря, поместите один поздний гермафродит стадии L4 в стеклянную пластину пятна с использованием ресниц забрать, как описано в ручном методе в разделе 1.1.2. Запись плавания видео одного червя в то время и использовать программное обеспечение червя трекер для расчета частоты изгибов тела.
   3. Следуйте сценарию, предоставленного с программным обеспечением отслеживания для получения частоты обмолота червя и для создания тепловых карт из данных обмолота червя.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Amphetamine	Sigma	51-63-8
Depression glass spot plate	Corning	Corning, Inc. 722085
Eye lash
Graphing and statistical software	Prism		Graphpad 5
Osmometer	Advanced Instruments, Inc	Model 3320
Spreadsheet	MS office		Microsoft Excel
Stereo Microscope	Zeiss	Model tlb3. 1 stemi2000
Sucrose	Sigma-Aldrich	RB=S5016
Superglue	Loctite	1647358 .14 oz.
SwimR sofware	10.18129/B9.bioc.SwimR
Tracker 2	Worm Tracker 2.0	www.mrc-lmb.cam.ac.uk/wormtracker/
Video recording software	Virtualdub	http://www.virtualdub.org/