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Encyclopedia of Experiments

水泳誘発性麻痺(SWIP)アッセイ:C.エレガンスにおけるドーパミン媒介性ロコモーションを定量化する方法

Overview

ここでは、泳ぐような激しい運動の間に起こるC.エレガンスの行動表現型であるSWIPを測定するためのアッセイを紹介する。 このプロトコル例では、手動分析アプローチと自動分析アプローチの両方について説明します。

Protocol

以下のプロトコルはカエノハブディティス・エレガンス、J.Vis.Exp.(2019年)におけるドーパミンシグナル伝達を評価するためのクドゥマラら、水泳誘発麻痺からの抜粋である。  

スウィップ

注:AMPHで処理した野生型ワームのSWIPを手動で評価する方法について説明する。また、自動化されたワームトラッカーと以前Hardawayらによって記述された追跡ソフトウェアを使用したワームの追跡とワーム動態のさらなる分析についても簡単に説明 します。

  1. SWIP をテストする手動方式
    1. アリコート 40 μL 200 mOsm/L スクロース溶液は、ガラススポットプレートに0.5 mM AMPHの有無にかかわらず。ステレオスコープの下で、まつげまたはプラチナピックで8-10 late-L4ステージワームを選び、ワームがピックから離れて溶液に泳ぐまで、溶液を含むプレートにピックを沈めます。井戸に取り込まれたワームの数に注意し、タイマーを開始し、毎分マークでSWIPを示すワームの数を観察し、記録します。
    2. 生データをスプレッドシートにコピーし、1分間に麻痺したワームの数をアッセイ全体でテストされたワームの総数で割り、100を掛けることで麻痺したワームの割合を計算します。パーセント値を任意のグラフおよび統計ソフトウェアにコピーし、XY グラフ形式を使用して、Y 軸にパーセント値を、X 軸に時間をプロットします。
    3. 双方向ANOVAを実行し、続いてポストホック分析(例えば、ボンフェローニ後検定)を行い、対照、AMPHグループおよび治療時間の間で統計的有意性を検定する。
  2. SWIPの自動分析
    1. 一度に 1 つのワームに対して自動分析を実行します。カメラをセットアップするプロトコル、トラッキングソフトウェア分析を実行するワームトラッカーソフトウェアとスクリプトは、Hardaway で詳細に説明されています。
    2. 簡単に言えば、セクション1.1.2の手動方法で説明されているように、単一の後期L4ステージの雌雄同体を、まつげピックを利用したガラススポットプレートに入れます。当時の1つのワームの水泳ビデオを記録し、ワームトラッカーソフトウェアを使用してボディベンドの頻度を計算します。
    3. 追跡ソフトウェアに付属のスクリプトに従って、ワームスラッシング頻度を取得し、ワームスラッシングデータからヒートマップを生成します。

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Materials

Name Company Catalog Number Comments
Amphetamine Sigma 51-63-8  
Depression glass spot plate Corning Corning, Inc. 722085
Eye lash
Graphing and statistical software Prism Graphpad 5
Osmometer Advanced Instruments, Inc Model 3320
Spreadsheet MS office Microsoft Excel
Stereo Microscope Zeiss Model tlb3. 1 stemi2000
Sucrose Sigma-Aldrich RB=S5016
Superglue Loctite 1647358 .14 oz.
SwimR sofware 10.18129/B9.bioc.SwimR
Tracker 2 Worm Tracker 2.0 www.mrc-lmb.cam.ac.uk/wormtracker/
Video recording software Virtualdub http://www.virtualdub.org/

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