Drosophila Aggression Assay: Eine Methode, um Verhaltensplastizität bei Fliegen zu testen

Overview

Aggression ist ein angeborenes Verhalten und frühere Kampferfahrung beeinflusst Kampfstrategie und Ergebnis späterer Wettbewerbe in Fliegen. Dieses Video beschreibt einen Test, der verwendet wird, um das aggressive Verhalten von Drosophilazu untersuchen. Das Beispielprotokoll enthält den Assay, der in einem Setup durchgeführt wird, das die Fliegenbehandlung eliminiert und somit die Belastung für die Tiere verringert, was sich sonst auf die Leistung der Probanden auswirken würde.

Protocol

Dieses Protokoll ist ein Auszug aus Trannoy et al., A New Approach that Eliminates Handling for Studying Aggression and the "Loser" Effect in Drosophila melanogaster, J. Vis. Exp. (2015).

1. Verhaltensexperiment

1. Führen Sie die Verhaltensexperimente mit 6-7-Tage-alten männlichen Fliegen durch.
2. Setzen Sie Kunststoffteiler in jede Kampfkammer ein.
3. Entfernen Sie den Baumwollstecker aus dem Isolationsrohr und positionieren Sie das Rohr unter einem offenen Loch an der Seite des Geräts.
4. Lassen Sie die Fliege durch negative Geotaxis in die Kampfkammer eintreten, in der Regel innerhalb weniger Sekunden.
5. Schließen Sie die Schiebewand, nachdem die Fliege das Rohr verlassen hat und in die Kammer eingetreten ist.
6. Wiederholen Sie den Vorgang, um die zweite Fliege in die Kampfkammer auf der anderen Seite des Geräts einzuführen.
7. Stellen Sie das Gerät wieder in die beleuchtete Videoaufnahmeposition.
8. Beginnen Sie mit der Videoaufzeichnung und entfernen Sie den Kunststoffteiler, damit Fliegen interagieren können.
   1. Für Aggressionsexperimente:
      1. In diesen Experimenten kämpfen Rekordkämpfe für mindestens 20 min, um die Bildung starker Dominanzbeziehungen zu gewährleisten.
      2. Beenden Sie nach der gewünschten Zeit die Videoaufzeichnung.
      3. Entfernen Sie Fliegen aus den Kampfkammern, indem Sie das oben beschriebene Verfahren umkehren.
      4. Waschen Sie das Verhaltensgerät nach jedem Gebrauch gründlich mit mildem Reinigungsmittel und Wasser und spülen Sie es gründlich.
   2. Für "Loser"-Effektexperimente:
      HINWEIS: In diesen Experimenten werden erste Kämpfe als Konditionierungsphase und zweite Kämpfe als Testphase betrachtet. Die Ruhezeit zwischen den Kämpfen kann unterschiedlich sein, aber 10 min ermöglicht die Bildung eines starken "Verlierer"-Effekts.
      1. Befolgen Sie das oben beschriebene Verfahren, um einen ersten Kampf durchzuführen.
      2. KRITISCHER SCHRITT: Um die Bildung einer "Verlierer"-Mentalität zu induzieren, stellen Sie sicher, dass die ersten Kämpfe mindestens 20 min lang sind, um starke Dominanzbeziehungen aufzubauen. Nach 20 min den Kunststoffteiler wieder in Kampfkammern einsetzen, um die Fliegen zu trennen.
      3. Nach einer 10-min-Ruhezeit entfernen Sie vorsichtig den Kunststoffteiler, damit Fliegen für zweite Kämpfe interagieren können.
      4. Am Ende des zweiten 20-min-Kampfes, stoppen Sie die Videoaufzeichnung.
      5. Entfernen Sie Fliegen aus Verhaltenskammern wie oben.
      6. Reinigen Sie erneut den Verhaltensapparat gründlich.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Behavioral chambers	Mike machine		Fabricated in-house. Directly contact the company for more information.
Borosilicate glass vials	VWR International	47729-576	16 x 10 mm
Cotton	Fisherbrand	22-456-881	Any brand can be used
Srew cap tube	VWR International	10011-394	15 mm diameter, 10 mm height
Plastic slices	Electron Microscopy Sciences	70329-40	22 x 40 x 0.25 mm Thickness
Light source (bulb)	VWR International	500003-418	Any brand can be used
Timer	VWR International	62344-641	Any brand can be used
Binocular	Nikon	SMZ-745	Any brand can be used
Camera (SONY Handycam HDR-CX330)	B&H	SOHDRCX330B	Any brand can be used