Drosofilia Saggio di aggressione: un metodo per testare la plasticità comportamentale nelle mosche

Overview

L'aggressività è un comportamento innato e la precedente esperienza di combattimento influisce sulla strategia di combattimento e sul risultato di concorsi successivi nelle mosche. Questo video descrive un saggio utilizzato per studiare il comportamento aggressivo di Drosophila. Il protocollo di esempio presenta il saggio eseguito in una configurazione che elimina la manipolazione della mosca e quindi riduce lo stress per gli animali, il che altrimenti influirebbe sulle prestazioni dei soggetti.

Protocol

Questo protocollo è un estratto da Trannoy et al., A New Approach that Eliminate Handling for Studying Aggression and the "Loser" Effect in Drosophila melanogaster, J. Vis. Exp. (2015).

1. Esperimento comportamentale

1. Esegui gli esperimenti comportamentali con mosche maschili di 6-7 giorni.
2. Inserire divisori di plastica in ogni camera di combattimento.
3. Rimuovere il tappo di cotone dal tubo di isolamento e posizionare il tubo sotto un foro aperto sul lato dell'apparecchio.
4. Lascia che la mosca entri nella camera di combattimento con geotassi negative, di solito in pochi secondi.
5. Chiudere la parete scorrevole dopo che la mosca ha lasciato il tubo ed è entrata nella camera.
6. Ripetere la procedura per introdurre la seconda mosca nella camera di combattimento dall'altra parte dell'apparato.
7. Riposizionare l'apparecchio nella posizione di videoregistrazione illuminata.
8. Inizia la registrazione video e rimuovi il divisore di plastica per consentire alle mosche di interagire.
   1. Per esperimenti di aggressione:
      1. In questi esperimenti, combattimenti record per almeno 20 minuti per garantire la formazione di forti relazioni di dominio.
      2. Dopo il tempo desiderato, interrompere la registrazione video.
      3. Rimuovere le mosche dalle camere di combattimento invertendo la procedura sopra descritta.
      4. Lavare accuratamente l'apparato comportamentale con detersivo delicato e acqua dopo ogni uso e risciacquare.
   2. Per esperimenti effetto "perdente":
      NOTA: In questi esperimenti, i primi combattimenti sono considerati come la fase di condizionamento e i secondi combattimenti come fase di test. Il periodo di riposo tra un combattimento e l'altro può differire, ma 10 minuti consentono la formazione di un forte effetto "perdente".
      1. Segui la procedura descritta sopra per eseguire un primo combattimento.
      2. PASSAGGIO CRITICO: Per indurre la formazione di una mentalità "perdente", assicurati che i primi combattimenti siano lunghi almeno 20 minuti al fine di stabilire forti relazioni di dominio. Dopo 20 minuti, riinserimento del divisore di plastica nelle camere di combattimento per separare le mosche.
      3. Dopo un periodo di riposo di 10 minuti, rimuovere delicatamente il divisore di plastica per consentire alle mosche di interagire per i secondi combattimenti.
      4. Alla fine del secondo combattimento di 20 minuti, interrompere la registrazione video.
      5. Rimuovere le mosche dalle camere comportamentali come sopra.
      6. Ancora una volta, pulire accuratamente l'apparato comportamentale.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Behavioral chambers	Mike machine		Fabricated in-house. Directly contact the company for more information.
Borosilicate glass vials	VWR International	47729-576	16 x 10 mm
Cotton	Fisherbrand	22-456-881	Any brand can be used
Srew cap tube	VWR International	10011-394	15 mm diameter, 10 mm height
Plastic slices	Electron Microscopy Sciences	70329-40	22 x 40 x 0.25 mm Thickness
Light source (bulb)	VWR International	500003-418	Any brand can be used
Timer	VWR International	62344-641	Any brand can be used
Binocular	Nikon	SMZ-745	Any brand can be used
Camera (SONY Handycam HDR-CX330)	B&H	SOHDRCX330B	Any brand can be used