Drosophila Ensaio de agressão: um método para testar a plasticidade comportamental em moscas

Overview

A agressão é um comportamento inato e a experiência de luta anterior afeta a estratégia de luta e o resultado de competições posteriores em moscas. Este vídeo descreve um ensaio usado para estudar o comportamento agressivo de Drosophila. O protocolo de exemplo apresenta o ensaio realizado em uma configuração que elimina o manuseio de moscas e, portanto, reduz o estresse para os animais, o que de outra forma afetaria o desempenho dos sujeitos.

Protocol

Este protocolo é um trecho de Trannoy et al., Uma Nova Abordagem que Elimina o Manuseio para Estudar Agressão e o Efeito "Perdedor" em Drosophila melanogaster, J. Vis. Exp. (2015).

1. Experimento Comportamental

1. Realize os experimentos comportamentais com moscas machos de 6 a 7 dias.
2. Insira divisores de plástico em cada câmara de combate.
3. Retire o plugue de algodão do tubo de isolamento e posicione o tubo abaixo de um orifício aberto na lateral do aparelho.
4. Deixe a mosca entrar na câmara de combate por geotaxis negativos, geralmente dentro de alguns segundos.
5. Feche a parede deslizante depois que a mosca saiu do tubo e entrou na câmara.
6. Repita o procedimento para introduzir a segunda mosca na câmara de combate do outro lado do aparelho.
7. Coloque o aparelho de volta na posição de videotaping iluminado.
8. Inicie a gravação de vídeo e remova o divisor de plástico para permitir que as moscas interajam.
   1. Para experimentos de agressão:
      1. Nesses experimentos, a record luta por pelo menos 20 minutos para garantir a formação de fortes relações de dominância.
      2. Após o tempo desejado, pare a gravação de vídeo.
      3. Remova as moscas das câmaras de combate invertendo o procedimento descrito acima.
      4. Lave bem o aparelho comportamental com detergente suave e água após cada uso e enxágue.
   2. Para experimentos de efeito "perdedor":
      NOTA: Nestes experimentos, as primeiras lutas são consideradas como a fase de condicionamento e segunda luta como a fase de teste. O período de descanso entre as lutas pode diferir, mas 10 min permite a formação de um forte efeito "perdedor".
      1. Siga o procedimento descrito acima para realizar uma primeira luta.
      2. PASSO CRÍTICO: Para induzir a formação de uma mentalidade "perdedora", garantir que as primeiras lutas sejam de pelo menos 20 minutos de duração, a fim de estabelecer fortes relações de dominância. Após 20 minutos, reinsira o divisor de plástico em câmaras de combate para separar as moscas.
      3. Após um período de descanso de 10 minutos, remova suavemente o divisor de plástico para permitir que as moscas interajam para segundas lutas.
      4. No final da segunda luta de 20 minutos, pare a gravação de vídeo.
      5. Remova moscas de câmaras comportamentais como acima.
      6. Mais uma vez, limpe completamente o aparelho comportamental.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Behavioral chambers	Mike machine		Fabricated in-house. Directly contact the company for more information.
Borosilicate glass vials	VWR International	47729-576	16 x 10 mm
Cotton	Fisherbrand	22-456-881	Any brand can be used
Srew cap tube	VWR International	10011-394	15 mm diameter, 10 mm height
Plastic slices	Electron Microscopy Sciences	70329-40	22 x 40 x 0.25 mm Thickness
Light source (bulb)	VWR International	500003-418	Any brand can be used
Timer	VWR International	62344-641	Any brand can be used
Binocular	Nikon	SMZ-745	Any brand can be used
Camera (SONY Handycam HDR-CX330)	B&H	SOHDRCX330B	Any brand can be used