드로소필라 Y-미로 분석: 파리의 후각 응답을 평가하는 방법

Overview

이 비디오는 Y-미로라고 불리는 과일 플라이에서 후각 탐색 동작을 테스트하는 방법을 설명합니다. 추천 프로토콜 클립은 분석기를 설정하고 수행하는 방법을 보여 줍니다.

Protocol

이 프로토콜 텍스트는 사이먼넷 외에서발췌입니다 ., Y-미로 분석, J. Vis. Exp와 드로소필라 올파션 테스트 . (2014).

1. 시작하기 전

1. 안정적이고 견고한 행동 표현형을 베어링하는 동소원형 기준 스톡을 사용하십시오. 모든 잠재적 인 컨트롤이 이기종 배경 을 수행 할 수 있기 때문에이 주식을 선택하는 일반적인 규칙이 없습니다.
2. 이 제어 변형을 사용하여 나중에 단계에 필요한 다른 모든 스톡을 백크로스합니다. 이 백크로그어 단계는 일반적으로 단일 처녀 여성의 적어도 5 연속 십자가 (동종 염색체 사이의 가능한 횡단을 허용하기 위해) 2-3 동종 참조 남성으로 표현됩니다. 이 단계는 다른 플라이 주식 사이의 유전 적 배경을 균질화하는 것이 중요합니다.
3. 일반 옥수수 가루(9%), 효모(10%), 한천매체(1.5%)에 드로소필라 주식을 유지 25°C에서 12시간 광/암사이클에서 항생제(0.4% 메틸 파라 하이드록시-벤조아테)로 보완하였다.
4. 멀리 적색광 하에서 온도 조절실(25°C)에서 화학 감각 실험을 달성한다(시각적 신호의 기여를 제거하고 화학 감각 신호에 집중). 각 실험 사이의 영역을 환기시키기 위해 정기적으로 방의 공기를 갱신합니다.

2. Y-미로 분석체를 사용한 후각 반응

1. 테스트 전에 젖은 종이 타월이 들어있는 유리 튜브에서 25 °C에서 16-18 시간 동안 파리를 굶어 버십시오.
2. 두 유리 바이알과 더 작은 플라스틱 바이알 (적재 유리)에 Y 모양 커넥터를 가입합니다. 폼 스토퍼를 통과하는 1ml 파이펫 팁을 사용하여 커넥터를 세 개의 바이알에 연결하고 단단히 밀봉 된 Y 미로를 얻습니다. 두 개의 파이펫 팁 (~2mm 직경의 좁은 끝을 잘라, 일단 결정을 내린 후 비행의 반환을 피하기 위해) 두 개의 "트랩"바이알을 형성하고, 하나의 파이펫 팁의 큰 끝은 "로딩"튜브를 형성(도 1A).
3. "트랩" 바이알(도1B)을연결하기 직전에 각 유리병에 직경 1~6mm의 필터 용지를 놓습니다. 하나의 필터 용지에 40 μl의 악취 용액을 추가하고 두 번째 필터 용지에 해당 용매의 40 μl을 추가합니다.
4. 4~9일 된 파리 10마리를 "적재" 바이알에 도입합니다. 이 전송 중에 CO₂ 마취를 사용하지 마십시오. 오히려 얼음에 짧은 냉각을 사용합니다. 마취 된 파리의 적절한 조작은 가능한 한 주제에 대한 스트레스를 제한하는 것이 중요합니다.
   1. 가능한 한 시각적 자극을 피하기 위해 광범위한 빨간색 표시등 (가능한 가열 소스를 제한하는 LED 전구를 사용하여) 25 °C에서 일련의 Y 미로 테스트를 수행하십시오. Y-미로의 방향을 번갈아 가며 주의하십시오 (왼쪽 또는 오른쪽에 튜브를 포함하는 악취, 앞이나 뒷면에 튜브를적재하십시오. 그림 1C).
   2. 소취 또는 용매를 포함하는 트랩 바이알에 파리가 들어가는 데 몇 시간을 허용하십시오. 카운트는 24시간 이후에 날아가 참여도를 80% 이상 증가시키고 최대 후각 지수 값(Simonnet, 개인 커뮤니케이션)을 제공합니다.
   3. 다음 공식을 사용하여 결과 후각 지수를 계산합니다: (악취 튜브의 수 - 용매 관의 수)/로드된 파리의 총 수입니다.
5. 다음과 같이 Y-미로 설정을 세척 : 하룻밤 RBS 35 MD에서 해체 된 설정을 흡수. 수돗물로 철저히 헹구십시오. 마침내 탈이온된 물로 헹구고 건조하게 하십시오.

3. 데이터의 통계 분석

1. 데이터 및 변수에 따라 t-test, 단방향 ANOVA 또는 양방향 ANOVA를 수행합니다.

Representative Results

그림 1: Y-미로 설정으로 평가된 남성 후각 반응. A) 분할 장치. B) 조립 된 장치. C) 극한의 빛 아래에서 작업 환경에서 설정합니다. D) 아세트산(AA) 또는 페닐레이스산(PAA)에 대한 수컷 후각 반응의 정량화는 증류수(10% v/v)(N=11)에서 희석된 다110파리를 나타낸다. 통계 분석은 데이터를 0으로 비교하는 t-테스트를 사용하여 수행되었습니다. 0은 선호도가 없음을 의미합니다. 음수 값은 냄새에 대한 혐오감을 나타내며, 긍정적인 값은 매력입니다. : p&0.0001; ns: 중요하지 않은 (p = 0.1680). 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Drosophila Polystyrene tube	VWR europe	734-2255	30 x 25 mm Y-maze
Drosophila Borosilicate tube	Dijon verre		95 X 25 mm Y-maze
Foam stopper	Dutscher	999038	Y-maze
Y-shaped connector	Europrix	11020605	Y-maze
100-1,000 µl pipette tips	Corning	4868	Join the following pipette tips to the Y-shaped connector. Cut 2 pipette tips at 65 mm from the wide end, and connect the narrow end (with a ~2 mm opening) to 2 test vials. These openings will limit the U-turns once the flies enter the tubes containing the odors. Cut 1 pipette tip at 35 mm from the wide end, and connect it to the loading vial.
Far-Red LED Bulb	Rubin-Lacaque	0RB180238	625-630 nm
Acetic Acid	Sigma-Aldrich	45725
Phenylacetic Acid	Sigma-Aldrich	P16621
Yeast	Sensient Flavors Strasbourg	1018880464
Cornmeal	eurogerm	Farine de maïs
Agar	Kalys	HP-697-25
Methyl hydroxy 4 benzoate	VWR international	25605293