Overview
此视频描述了一种测试果蝇嗅觉探索行为的方法，称为 Y-maze。特色协议剪辑演示了如何设置和进行检测。
Protocol
此协议文本是西蒙内特等人的摘录， 测试德罗索菲拉嗅觉与 Y 迷宫分析， J. Vis. Exp. 。(2014).
1. 开始前
- 使用具有稳定和稳健行为表型的等生参考库存。没有选择此股票的一般规则，因为所有潜在的控制可能携带异质背景等位基因。
- 使用此控制应变回过后步骤所需的所有其他库存。此反向交叉步骤通常由单个处女女性的至少 5 个连续交叉表示（允许同源染色体之间可能交叉）到 2–3 同源性参考男性。这一步骤对于使不同苍蝇种群之间的遗传背景同质化非常重要。
- 维持标准玉米粉（9%）、酵母（10%）和阿加中等（1.5%）的 磷脂 库存辅以抗生素（0.4%甲基对羟基苯甲酸酯），在25°C的12小时光/暗循环中。
- 在远红灯下的温度控制室（25 °C）进行化学感官实验（消除视觉暗示的贡献，并专注于化学感官信号）。定期更新房间的空气，在每个实验之间通风。
2. 使用 Y 迷宫分析的嗅觉响应
- 在测试前，在含有湿纸巾的玻璃管中，将苍蝇在25°C时饿死16~18小时。
- 将 Y 形连接器连接到两个玻璃瓶和一个较小的塑料小瓶（加载小瓶）。使用通过泡沫塞的 1 毫升移液器提示将连接器连接到三个小瓶，并获取紧密密封的 Y-maze。切开两个移液器尖端（直径约2毫米，以避免苍蝇在做出决定后返回），形成两个"陷阱"小瓶，以及一个移液器尖端的大端，形成"加载"管（图1A）。
- 就在连接"陷阱"小瓶（图1B）之前，将一张直径约6毫米的滤纸放在每个小瓶中。在一张滤纸上加入 40μl 的异味溶液，在第二张滤纸上加入 40μl 的相应溶剂。
- 将10只4至9天大的苍蝇引入"装载"小瓶中。在此转移过程中不要使用 CO2 麻醉，因为它对行为有很强的影响。而是在冰上使用短暂的冷却。正确操纵麻醉苍蝇对于尽可能减轻受试者的压力非常重要。
- 在远红灯下（使用 LED 灯泡限制可能的加热源）在 25 °C 下进行一系列 Y-maze 测试，以尽可能避免视觉刺激。小心交替Y-mazes的方向（左侧或右侧含有管子的异味，前部或背面装有管子： 图 1C）。
- 允许苍蝇进入含有异味剂或溶剂的陷阱小瓶中几个小时。计数苍蝇后24小时，以增加参与高达80%以上，并提供最大的嗅觉指数值（西蒙内特，个人沟通）。
- 使用以下公式计算由此产生的嗅觉指数：（气味管中的数字 - 溶剂管中的编号）/加载苍蝇总数。
- 洗 Y 迷宫设置如下： 浸泡在苏格兰皇家银行 35 MD 拆除设置过夜。用自来水彻底冲洗。最后用除离子水冲洗，让干涸。
3. 数据统计分析
- 根据数据和变量执行 t 测试、单向 ANOVA 或双向 ANOVA。
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
图1：男性嗅觉反应评估与Y迷宫设置。A）拆分设备。B）组装设备。C）在远红灯下处于工作状态。D）在蒸馏水中稀释的男性对醋酸 （AA） 或苯乳酸 （PAA） 的嗅觉反应的量化 （10% v/v） （N = 11，共代表 110 苍蝇）。使用将数据与 0 进行比较的 t 测试进行统计分析。0表示无偏好。负值表示对气味的厌恶，对吸引力的正面值。：p&0.0001：ns： 不重要（p = 0.1680）。请单击此处查看此图的更大版本。
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Drosophila Polystyrene tube | VWR europe | 734-2255 | 30 x 25 mm Y-maze |
| Drosophila Borosilicate tube | Dijon verre | 95 X 25 mm Y-maze | |
| Foam stopper | Dutscher | 999038 | Y-maze |
| Y-shaped connector | Europrix | 11020605 | Y-maze |
| 100-1,000 µl pipette tips | Corning | 4868 | Join the following pipette tips to the Y-shaped connector. Cut 2 pipette tips at 65 mm from the wide end, and connect the narrow end (with a ~2 mm opening) to 2 test vials. These openings will limit the U-turns once the flies enter the tubes containing the odors. Cut 1 pipette tip at 35 mm from the wide end, and connect it to the loading vial. |
| Far-Red LED Bulb | Rubin-Lacaque | 0RB180238 | 625-630 nm |
| Acetic Acid | Sigma-Aldrich | 45725 | |
| Phenylacetic Acid | Sigma-Aldrich | P16621 | |
| Yeast | Sensient Flavors Strasbourg | 1018880464 | |
| Cornmeal | eurogerm | Farine de maïs | |
| Agar | Kalys | HP-697-25 | |
| Methyl hydroxy 4 benzoate | VWR international | 25605293 |
