德罗索菲拉 产卵偏好测定：测试苍蝇决策的方法

Overview

德罗索菲拉 女性在基材和选择对产卵有吸引力的地点之间做出选择。此视频描述了测试其决策的行为检测，称为产卵偏好检测。特色剪辑演示了自定义构建设置的程序，使研究人员不仅能够同时测试许多女性的行为，而且还与视频录制和光遗传设置兼容。

Protocol

该协议是郭和等人的摘录，高吞吐量分析，以检查个人德罗索菲拉梅拉诺加斯特 ，J.Vis.Exp的产卵偏好。(2016).

1. 室内建筑、装配、测定设置

1. 有一个机器车间建立丙烯酸蛋产室（图1A-D）。不同作品的工程图见补充图1-3。高分辨率图片也可以在这里找到（http://www.rebeccayang.org/pdf/chamber%20设计.pdf）。
2. 将塑料布插入到腔室的加载（顶部）部分，如 图 1C所示。这是底部表面，而加载苍蝇到个别产卵竞技场。
3. 在 CO₂ 垫上麻醉女性，并将它们单独加载到每个产卵竞技场。允许苍蝇在 30 分钟内从 CO₂ 中恢复并适应新环境。
4. 准备阿加罗斯基材。
   1. 为了方便起见，请在 55 °C 的水浴中保存一瓶预制的融化的 1% agarose。
   2. 将所需的库存蔗糖溶液 （2 M） 添加到 50 毫升圆锥管中，并将其与适量的蔗糖混合。例如，要准备 150 mM 蔗糖基板，将 750 μl 的 2 M 蔗糖溶液放入管中，然后用蔗糖填充管子至 10 毫升标记。
   3. 以同样的方式准备普通基材，但加入蒸馏水，而不是蔗糖溶液。
      注： 此协议中阿加罗斯的最终浓度略低于 1%。根据我们的经验，只要将蔗糖的精确浓度控制在 0.9 - 1.1% 以内，并且两个基材的糖糖浓度相同，就无关紧要了。
5. 将腔室的基板（底部）部分和移液器 1，000 μl 的 agarose 基板放入每个槽中，如 图 1D中所见。
6. 允许阿加罗斯凝固约30分钟。
7. 一旦蔗糖基板和苍蝇准备好，组装所有三块产卵室，然后拿出塑料布。
8. 将房间放置在苍蝇孵化器中。
   注： 产卵实验的长度可能因实验需要而异。我们通常运行实验 O/N （14 - 16 小时）。此外，没有观察到昼夜计时对产卵偏好的重大影响。
9. 通过_{将二氧化碳} 注射到腔室中来麻醉女性。拆开房间，把麻醉的苍蝇扔进飞太平间（即空咖啡罐里装满一些玉米油）。拍摄记录记录结果的照片（见 图 2）。
10. 手动计算鸡蛋数量，并计算用于分析的偏好指数。将偏好指数计算为（N_a - N b）/（N_a = N_b），其中 N_a和 N_b分别表示现场与站点 b 的鸡蛋数量。

Representative Results

图1：产卵室和产卵议定书。 （A） 完全组装的产卵室。（B） 拆解件。a： 加载件（顶部）、b：分隔板件（中间）、c：基板（底部）件。这些作品的工程图见 补充图1-3。（C） 房间的装载件。a'：推拉门，a"：铁轨。塑料布入装载件，作为地板，以保持加载的苍蝇到位。我们通常将彩色胶带放在塑料板（红色箭头）的边缘。（D） 机舱的基板（底部）和分隔板（中间）件。阿加罗斯被沉积到单独的槽中，作为产卵基材（箭头）。四边形勾勒出单只苍蝇的产卵竞技场。（E） 在酵母小瓶中收集的女性/男性的第0天。（F） 第 4 - 5 天收集的女性/男性在酵母小瓶。请注意，幼虫和成年雌性已经吃掉了大部分酵母，食物的表面已被幼虫占据。潮湿的表面食物与幼虫一起爬行，防止雌性在小瓶中产下更多的卵子。（G） 示意图描绘了设置产卵行为实验的协议。 请单击此处查看此图的更大版本。

图2：在蔗糖和普通基材之间选择的苍蝇具有代表性的产卵结果。 （A） 野生型苍蝇在蔗糖（150米）和普通基材之间做出选择时，对产卵结果的侧视图。白盒子勾勒出一只苍蝇的产卵竞技场。（B） 产卵结果的顶级视图。白盒子勾勒出一只苍蝇的产卵竞技场。（C） 当被要求在含蔗糖的基材和普通基材之间做出选择时，野生型苍蝇的偏好指数 （PI）。每个女性的 PI 计算如下：（蔗糖基板上的卵子数量 - 普通基材上的卵子数量）/卵子总数。错误栏表示 Sem. 请单击此处查看此图的更大版本。

补充图1：分隔器和分庭基板件的工程图纸。 （A-A）房间基板部分的不同视图。（B-B）房间中间隔板部分的不同视图。 请单击此处查看此图的更大版本。

补充图2：会议厅装载件的工程图纸。 （A-A'）房间装载件上层的不同视图。（B-B）房间装载件底部层的不同视图。 请单击此处查看此图的更大版本。

补充图3：会议厅上滑动门和铁轨的工程图。 （A） 铁轨固定在房间的顶部。（B） 房间的推拉门。 请单击此处查看此图的更大版本。

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
UltraPure Agarose	Invitrogen	16500-500
Sucrose	Sigma	S0389
Water bath	Fisher	15-462-6Q
Egg-laying chambers	Custom Built
Fly vials (narrow)	Genesee	32-116BC