Egg Laying Assay: Eine Methode zur Quantifizierung des Ei-Laying-Verhaltens von C. elegans

Overview

C. elegans Ei-Laying-Verhalten kann wichtige Informationen in Entwicklungs-, Reproduktions- und anatomischen Studien liefern.  Dieses Video stellt die wichtigen Schritte eines Eierlegen-Assays vor und zeigt ein Probenexperiment, bei dem ein Medikament auf Reproduktionstoxizität getestet wird.

Protocol

Lee and Kang, Measuring the Effect of Chemicals on the Growth and Reproduction of Caenorhabditis elegans, J. Vis. (2017).

1.C. elegans Egg Laying Assay

1. Die alterssynchronisierten Eier auf dem NGM-Teller mit DMSO oder Etoposid für 64 h (vor der ersten Geburt) bis zum Stadium des jungen Erwachsenen bei 20 °C inkubieren.
   HINWEIS: Es ist optional, die Würmer aus den Wachstumsmessexperimenten zu verwenden. Es ist bequem, die Wachstumsmessung und Eilegen Assay zusammen zu tun.
2. Übertragen Sie 5 erwachsene Würmer ohne Chemikalien (Bedingung 1, chemische Behandlung innerhalb eines bestimmten Zeitraums, von Eiern in junge Erwachsene) oder neue NGM-Platte, die die gleiche chemische Vorbehandlung enthält (Bedingung 2, kontinuierliche Exposition von Chemikalien während des gesamten Versuchszeitraums), und inkubieren Sie sie dann für 24 h.
   HINWEIS: Es wird empfohlen, Replikationen mit 3-5 NGM-Platten für jede Behandlung zu machen; Diese Replikationen können für statistische Analysen verwendet werden.
3. Übertragen Sie auf das neue NGM-Platte wie oben beschrieben und zählen Sie die Anzahl der Eier jeden Tag. Zähle die Würmer, die abkrochen, starben und innerlich geschlüpft waren.
4. Wiederholen Sie diese Schritte, bis die Würmer keine Eier mehr legen, in der Regel in 5 Tagen.
5. Berechnen Sie die Anzahl der Eier, die pro Wurm von jedem Teller gelegt werden, und summieren Sie diese Werte jeden Tag für 5 Tage, um die Gesamtzahl der gelegten Eier zu bestimmen.
   HINWEIS: Schließen Sie die Anzahl der Würmer aus, die aus der Berechnung gekrochen und intern geschlüpft sind.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Caenorhabditis elegans N2	Caenorhabditis Genetics Center (CGC)		Wild type
Dimethyl sulfoxide	Sigma, USA	D2650
Escherichia coli OP50	Caenorhabditis Genetics Center (CGC)
Etoposide	Sigma, USA	E1383
35 × 10 mm Petri dish	SPL Life Sciences, South Korea	10035
Stereo microscope	Nikon, Japan	SMZ800N