Saggio di deposizione delle uova: un metodo per quantificare il comportamento di deposizione delle uova di C. elegans

Overview

C. il comportamento di deposizione delle uova elegans può fornire informazioni importanti negli studi di sviluppo, riproduttivi e anatomici.  Questo video introduce i passaggi importanti di un test di deposizione delle uova e mostra un esperimento campione in cui un farmaco viene testato per la tossicità riproduttiva.

Protocol

Lee and Kang, Measuring the Effect of Chemicals on the Growth and Reproduction of Caenorhabditis elegans, J. Vis. Exp. (2017).

1.C. saggio di deposizione delle uova elegans

1. Incubare le uova sincronizzate con l'età sulla piastra NGM contenente DMSO o etoposide per 64 ore (prima della prima nascita) fino allo stadio del giovane adulto a 20 °C.
   NOTA: È facoltativo utilizzare i worm degli esperimenti di misurazione della crescita. È conveniente fare la misurazione della crescita e il test di deposizione delle uova insieme.
2. Trasferire 5 vermi adulti nelle nuove piastre NGM senza sostanze chimiche (condizione 1, trattamento chimico entro un certo periodo di tempo, dalle uova allo stadio dei giovani adulti) o nuova piastra NGM contenente lo stesso pretrattamento chimico (condizione 2, esposizione continua di sostanze chimiche durante il periodo sperimentale complessivo), quindi incubarli per 24 ore.
   NOTA: Si consiglia di effettuare repliche utilizzando piastre 3-5 NGM per ogni trattamento; queste repliche possono essere utilizzate per l'analisi statistica.
3. Trasferire sulla nuova piastra NGM come descritto sopra e contare il numero di uova ogni giorno. Contare i vermi che strisciavano via, morivano e venivano nati internamente.
4. Ripeti questi passaggi fino a quando i vermi non depongono più uova, di solito in 5 giorni.
5. Calcola il numero di uova deposte per verme da ogni piatto e somma questi valori ogni giorno per 5 giorni per determinare il numero totale di uova deposte.
   NOTA: Escludere dal calcolo il numero di worm che sono stati strisciati fuori e tratteggiati internamente.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Caenorhabditis elegans N2	Caenorhabditis Genetics Center (CGC)		Wild type
Dimethyl sulfoxide	Sigma, USA	D2650
Escherichia coli OP50	Caenorhabditis Genetics Center (CGC)
Etoposide	Sigma, USA	E1383
35 × 10 mm Petri dish	SPL Life Sciences, South Korea	10035
Stereo microscope	Nikon, Japan	SMZ800N