Overview
C. elegans яйцекладка поведение может предоставить важную информацию в развитии, репродуктивных и анатомических исследований. Это видео вводит важные шаги анализа яйцекладки и показывает образец эксперимента, в котором препарат проверяется на репродуктивную токсичность.
Protocol
Ли и Кан, Измерение влияния химических веществ на рост и воспроизводство Caenorhabditis elegans, J. Vis. Exp. (2017).
1.C. elegans Яйцо Укладка Анализ
- Инкубировать возраст синхронизированные яйца на пластине NGM, содержащей DMSO или этопозид в течение 64 ч (до первого рождения) до стадии молодого взрослого на 20 градусов по Цельсию.
ПРИМЕЧАНИЕ: Необязательно использовать червей из экспериментов измерения роста. Удобно делать измерения роста и яйцекладки анализ вместе. - Передача 5 взрослых червей на новые пластины NGM без химических веществ (условие 1, химическая обработка в течение определенного периода времени, от яиц до стадии молодых взрослых) или новая пластина NGM, содержащая ту же химическую предварительную обработку (условие 2, непрерывное воздействие химических веществ в течение всего экспериментального периода), а затем инкубировать их в течение 24 ч.
ПРИМЕЧАНИЕ: Рекомендуется делать репликации с использованием 3-5 NGM пластин для каждого лечения; эти репликации могут быть использованы для статистического анализа. - Перенесите на новую пластину NGM, как описано выше, и подсчитайте количество яиц каждый день. Подсчитайте червей, которые отползли, умер, и были внутренне вылупились.
- Повторите эти шаги, пока черви не откладывают больше яиц, как правило, в 5 дней.
- Рассчитайте количество яиц, отложенных на червя с каждой тарелки, и суммировать эти значения каждый день в течение 5 дней, чтобы определить общее количество отложенных яиц.
ПРИМЕЧАНИЕ: Исключите количество червей, которые отползли и внутренне вылупились из расчета.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Caenorhabditis elegans N2 | Caenorhabditis Genetics Center (CGC) | Wild type | |
| Dimethyl sulfoxide | Sigma, USA | D2650 | |
| Escherichia coli OP50 | Caenorhabditis Genetics Center (CGC) | ||
| Etoposide | Sigma, USA | E1383 | |
| 35 × 10 mm Petri dish | SPL Life Sciences, South Korea | 10035 | |
| Stereo microscope | Nikon, Japan | SMZ800N |
