Touch Habituation Assay: een methode om niet-associatief leren te bestuderen bij C. elegans

Overview

Deze video introduceert de touch habituation assay, een C. elegans gedragsmethode om mechanosensatie te beoordelen en de tijd tot gewent te kwantificeren.

Protocol

Het volgende protocol is een fragment uit Mersha et al. Langdurige gedrags- en reproductieve gevolgen van embryonale blootstelling aan lage dosis toxische stoffen, J. Vis. Exp. (2018)

1. Anterior Touch Gewenkingstest
   1. Breng ongeveer 10 gesynchroniseerde jongvolwassen wormen over naar nieuwe onuitgemaakte NGM-platen met behulp van een met vuur gesteriliseerde 30 G platina draadpick. Laat wormen 5 minuten ongestoord om ze de tijd te geven om aan de nieuwe plaat te acclimatiseren.
   2. Gebruik voor de gewentreactie een wenkbrauwhaar dat aan het uiteinde van een houten spies of tandenstoker is bevestigd en steriliseer door 70% ethanol in te dompelen. Veeg af met een schoon pluisvrij weefsel en wacht 1 minuut tot ethanol is verdampt. Raak de worm voorzichtig aan op het hoofd (voorste van de faryngeale bol) met behulp van het wenkbrauwhaar. Herhaal de aanrakingen, zodat 10 s tussen aanrakingen om de worm te laten herstellen.
   3. Blijf aanraken (10 s interstimulus intervallen toestaan) totdat de worm niet meer achteruit beweegt. Op dit punt is de worm gewend aan de stimulus. Registreer het aantal aanrakingen dat nodig is om de worm te laten bewonen.
   4. Analyseer het verschil tussen de gemiddelde gewenkingspercentages van de behandelde en onbehandelde besturingselementen met behulp van eenrichtings ANOVA, gevolgd door de post-hoctest van Tukey.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
EtOH	Sigma-Aldrich	64-17-5
N2 (Wild-type C. elegans) worms	CGC		Repository at U of Minnesota
Platinum wire pick	Genesee Scientific	59-AWP
Petri plates	Fisher	07-202-011
Dissection Microscope	AmScope	SM-2TYY