Touch Habituation Assay: Eine Methode, um nicht-assoziatives Lernen in C. elegans zu studieren

Overview

Dieses Video stellt den Touch Habituation Assay vor, eine C. elegans Verhaltensmethode zur Beurteilung der Mechanosensation und zur Quantifizierung der Zeit bis zur Gewöhnung.

Protocol

Das folgende Protokoll ist ein Auszug aus Mersha et al. Langfristige Verhaltens- und Reproduktionsfolgen der embryonalen Exposition gegenüber niedrig dosierten Toxischen Stoffen, J. Vis. Exp. (2018)

1. Anterior Touch Habituation Assay
   1. Übertragen Sie ca. 10 synchronisierte junge erwachsene Würmer auf neue, nicht ausgesäte NGM-Platten mit einem feuersterilisierten 30 G Platindrahtpick. Lassen Sie Würmer 5 min ungestört, um ihnen Zeit zu geben, sich an die neue Platte zu akklimatisieren.
   2. Für die Gewöhnungsreaktion verwenden Sie ein Augenbrauenhaar, das am Ende eines Holzspießes oder Zahnstochers befestigt ist, und sterilisieren Sie, indem Sie 70% Ethanol eintauchen. Wischen Sie mit einem sauberen fusselfreien Gewebe ab und warten Sie 1 min, bis Ethanol verdunstet. Berühren Sie den Wurm vorsichtig auf dem Kopf (Vorderkörper der Rachenkugel) mit dem Augenbrauenhaar. Wiederholen Sie die Berührungen, so dass 10 s zwischen den Berührungen, um den Wurm zu erholen.
   3. Fahren Sie mit dem Berühren fort (erlaubt 10 s Interstimulus-Intervalle), bis sich der Wurm nicht mehr rückwärts bewegt. An diesem Punkt hat sich der Wurm an den Reiz gewöhnt. Zeichnen Sie die Anzahl + ber der Berührungen auf, die erforderlich sind, damit sich der Wurm angewöhnt.
   4. Analysieren Sie den Unterschied zwischen den mittleren Gewöhnungsraten der behandelten und der unbehandelten Steuerelemente mithilfe von einseitiger ANOVA, gefolgt von Tukeys Post-hoc-Test.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
EtOH	Sigma-Aldrich	64-17-5
N2 (Wild-type C. elegans) worms	CGC		Repository at U of Minnesota
Platinum wire pick	Genesee Scientific	59-AWP
Petri plates	Fisher	07-202-011
Dissection Microscope	AmScope	SM-2TYY