Test di assunzione del tocco: un metodo per studiare l'apprendimento non associativo in C. elegans

Overview

Questo video introduce il saggio di assuazione del tocco, un metodo comportamentale C. elegans per valutare la meccanosensazione e quantificare il tempo di assunzione.

Protocol

Il seguente protocollo è un estratto da Mersha et al. Conseguenze comportamentali e riproduttive a lungo termine dell'esposizione embrionale a sostanze tossiche a basse dosi, J. Vis. Exp. (2018)

1. Test di assunzione del tocco anteriore
   1. Trasferire circa 10 vermi adulti sincronizzati in nuove piastre NGM non sementi utilizzando un piccone di filo di platino 30 G sterilizzato dal fuoco. Lasciare i vermi indisturbati per 5 minuti per concedere loro il tempo di acclimatarsi alla nuova piastra.
   2. Per la risposta all'assunzione, utilizzare un capello attaccato all'estremità di uno spiedino di legno o uno stuzzicadenti e sterilizzare immergersi nel 70% di etanolo. Pulire con un tessuto pulito privo di pelucchi e attendere 1 minuto perché l'etanolo evapori. Toccare delicatamente il verme sulla testa (anteriore del bulbo faringeo) usando i peli del sopracciglio. Ripeti i tocchi, permettendo 10 s tra un tocco e l'altro per consentire al verme di riprendersi.
   3. Continuare a toccare (consentendo intervalli di interstimolo di 10 s) fino a quando il verme non si sposta più all'indietro. A questo punto, il verme si è abituato allo stimolo. Registrare il numero+di tocchi necessari per l'abitudine del worm.
   4. Analizzare la differenza tra i tassi di assunzione media dei controlli trattati e non trattati utilizzando ANOVA uni-way seguito dal test post hoc di Tukey.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
EtOH	Sigma-Aldrich	64-17-5
N2 (Wild-type C. elegans) worms	CGC		Repository at U of Minnesota
Platinum wire pick	Genesee Scientific	59-AWP
Petri plates	Fisher	07-202-011
Dissection Microscope	AmScope	SM-2TYY