Touch Habituation Assay: En metode for å studere ikke-assosiativ læring i C. elegans

Overview

Denne videoen introduserer touch habituation-analysen, en C. elegans atferdsmetode for å vurdere mekanosenering og kvantifisere tid til habituation.

Protocol

Følgende protokoll er et utdrag fra Mersha et al. Langsiktige atferdsmessige og reproduktive konsekvenser av embryonal eksponering for toksiske stoffer med lav dose, J. Vis. Exp. (2018)

1. Fremre touch habituation analyse
   1. Overfør omtrent 10 synkroniserte unge voksne ormer til nye usette NGM-plater ved hjelp av et brannsterilisert 30 G platinatrådplukk. La ormer være uforstyrret i 5 minutter for å gi dem tid til å akklimatisere seg til den nye platen.
   2. For habituation respons, bruk et øyenbryn hår festet til enden av en tre spyd eller tannpirker, og sterilisere ved å dyppe i 70% etanol. Tørk med et rent lofritt vev og vent i 1 min på at etanol skal fordampe av. Berør forsiktig ormen på hodet (fremre av pharyngeal pæren) ved hjelp av øyenbrynshåret. Gjenta berøringene, slik at 10 s mellom berøringer for å la ormen gjenopprette.
   3. Fortsett å berøre (tillater 10 s interstimulusintervaller) til ormen ikke lenger beveger seg bakover. På dette tidspunktet har ormen habituated til stimulansen. Registrer antall +ber av berøringer som kreves for at ormen skal habituate.
   4. Analyser forskjellen mellom gjennomsnittlige habituation rater av de behandlede og ubehandlede kontrollene ved hjelp av enveis ANOVA etterfulgt av Tukeys post hoc-test.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
EtOH	Sigma-Aldrich	64-17-5
N2 (Wild-type C. elegans) worms	CGC		Repository at U of Minnesota
Platinum wire pick	Genesee Scientific	59-AWP
Petri plates	Fisher	07-202-011
Dissection Microscope	AmScope	SM-2TYY