Фотомоторный анализ ответов: Метод измерения поведенческой реакции Larval Зебрафиш на внезапное изменение состояния освещения

Overview

Это видео описывает фотомотор ответ анализ зебры и жира minnow личинок с помощью автоматизированного программного обеспечения отслеживания. Протокол измеряет поведенческую реакцию личиночинок рыбы после внезапного изменения состояния освещения.

Protocol

1. Калибровка параметров видеонаблюдения

1. Перед поведенческими мерами установите параметры наблюдения и калибровки в программном обеспечении видео-трека (см. таблицу материалов).
   1. Поместите хорошо пластины в камере записи, по крайней мере 1 личинки рыбы в отдельных хорошо. Используйте пластину и связанную с ней рыбу в качестве представлений для настройки параметров калибровки.
   2. В программном обеспечении для видео-трека нажмите кнопку "Файл | Создать протокол", который откроет диалоговую шкатулку "Мастер создания протокола". В поле "Location Count" введите количество отдельных колодцев скважины, а затем нажмите кнопку "ОК".
   3. В верхней части экрана нажмите кнопку "Посмотреть | Полный экран", который подскажет системе отображать вид камеры сверху пластины.
   4. Нажмите на значок "Draw Areas", который отображается как три разноцветные фигуры. Справа от смотровой площадки хорошо, выберите значок круга в поле с пометкой "Области".
   5. Используйте курсор, чтобы очертить круговую область отслеживания видео в левом верхнем слева от пластины хорошо. Выберите "Top-Right Mark", а затем наметить область просмотра в правом верхнем хорошо. Затем выберите "Нижний знак", чтобы наметить право внизу хорошо.
      ПРИМЕЧАНИЕ: После рисования кругового контура, его положение, вероятно, должны быть скорректированы.  Чтобы настроить положение контура, нажмите кнопку "Выбрать", а затем используйте курсор для перемещения изложенной области. Кроме того, очертания могут быть воспроизведены, нажав кнопку"Копия",а затем "Вставить".
   6. После того, как в правом верхнем углу, в правом верхнем углу и в правом нижнем углу были определены области отслеживания, нажмите кнопку "Build", чтобы побудить программное обеспечение автоматически разграничить области обзора остальных скважин.
   7. В области с пометкой "Калибровка" нажмите кнопку "Draw Scale". Используйте курсор, чтобы нарисовать горизонтальную линию по всей пластине. После того, как линия нарисована, появится диалоговая шкатулка с пометкой "Измерение калибровки". Введите длину пластины и нажмите кнопку "Хорошо".
   8. Выйти из чертежа менеджера, нажав на значок "Draw Areas".
   9. Нажмите значок "Tiles".  Используя курсор, выделите все коробки, которые появляются на экране просмотра, чтобы каждая коробка была зеленой.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Значок плитки отображается как группа из шести отдельных небольших квадратов
   10. "Нажмите Вид| Полный экран".  Справа от зоны просмотра таблички щелкните "Bkg" в коробке с пометкой "Порог обнаружения". Используйте планку регулировки порога для настройки порога обнаружения пикселей. После выбора соответствующего порога обнаружения пикселей нажмите кнопку "Применить к группе".
       ПРИМЕЧАНИЕ: Этот протокол устанавливает порог обнаружения на 13 в черном режиме для наблюдений зебры и на 110 в прозрачном режиме для наблюдений fathead minnow.
   11. В коробке с пометкой "Порог движения" введите нужные параметры отслеживания скорости движения. Как только параметры скорости установлены, нажмите кнопку "Применить к группе".
       ПРИМЕЧАНИЕ: Этот протокол устанавливает малые/большие движения на 20 мм/с и неактивные/малые движения на 5 мм/с. Эти выборы программы программного обеспечения для отслеживания личинок движения рыбы на трех различных уровнях скорости: неактивные (замораживание) - lt;5 мм/с, малые (круизы) - 5-20 мм/с, и большие (взрывные) - 20 мм/с.
   12. Нажмите "Параметры | Параметры протокола" из выпадают из меню. В поле диалога выберите вкладку "Время". Введите время наблюдения и время интеграции. После ввесят параметры нажмите кнопку "Хорошо".
   13. Чтобы установить свет / темные времени photoperiod и интенсивность света для каждого photoperiod открыть свет драйвера настройки диалог поле, выбрав "Light Driving" из "Параметры" падение вниз меню.
       ПРИМЕЧАНИЕ: Смотрите протокол видео для установки нескольких светло-темных photoperiods.
   14. После настройки параметров видеонаблюдения сохраните протокол наблюдения.
       ПРИМЕЧАНИЕ: Этот протокол наблюдает поведение рыб в течение 50-минутного периода, который включает в себя 10 минут акклиматизации фазы следуют 4 изменения света / темные фазы, состоящие из двух 10 мин световых периодов и два 10 мин темных периодов. Время интеграции устанавливается для измерения поведения для каждой минуты 50-минутного поведенческого исследования.

2. Наблюдение larval Рыба Локомотив и Фотомотор поведение

1. Поместите пластину с экспериментальной рыбой в поведенческую камеру записи.
2. В программном обеспечении для отслеживания видео откройте протокол отслеживания, разработанный на следующем этапе.
3. В видео слежения зрителя, убедитесь, что все личинки видны на экране компьютера, что только один отдельный личинки присутствует в каждой скважине, и что отдельные скважины выровнены в пределах областей наблюдения, которые были определены в шагах 1.1.5 и 1.1.6.
4. Нажмите на кнопку "| Выполнить".
   ПРИМЕЧАНИЕ: Система подскажет пользователю предоставить имя и местоположение для сохранения данных наблюдений.
5. После определения имени и сохранения местоположения данных наблюдений нажмите на значок "Несколько живых изображений", чтобы выделить все заранее определенные области просмотра
   ПРИМЕЧАНИЕ: Эта иконка расположена в верхней части экрана компьютера и отображается как коробка, разделенная на четыре меньших квадрата. Нажатие на эту иконку выделит все заранее определенные области просмотра.
6. Закройте панель камеры записи и нажмите кнопку "Фон | Запуск" на мониторе компьютера.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
48-well plates	Fisher Scientific	08-772-52	Larval zebrafish behavioral recording chambers
24-well plates	VWR	10062-896	Larval fathead minnow behavioral recording chambers