एस्केप रिस्पांस परख: स्टिमुली को छूने के लिए जेब्राफिश लार्वा की प्रतिक्रिया का अध्ययन करने के लिए एक विधि

Overview

यह वीडियो टच-इवोक रिस्पांस परख का वर्णन करता है, जो उत्तेजनाओं को छूने के लिए जेब्राफिश लार्वा की प्रतिक्रिया को मापता है।

Protocol

1. टच-पैदा की गई प्रतिक्रिया परख

1. टच-पैदा की प्रतिक्रिया परख के लिए 2 डीपीएफ भ्रूण की तैयारी
   1. सुनिश्चित करें कि जिस दिन परीक्षण किया जाता है उसका समय प्रयोगों के बीच संगत है क्योंकि गतिविधि पूरे दिन नाटकीय रूप से भिन्न हो सकती है।
      नोट:प्रयोग अंधा किया जाना चाहिए और प्रयोगात्मक कलाकृतियों को कम करने के लिए यादृच्छिक परीक्षण के आदेश ।
   2. मछली को एक संख्या को असाइन करें, जो प्रयोग करने वाले व्यक्ति के लिए अज्ञात है। इसके बाद, स्वतंत्र रूप से उपलब्ध ऑनलाइन टूल का उपयोग करके एक यादृच्छिक सूची उत्पन्न होती है जो परीक्षण के क्रम को तय करती है।
   3. परीक्षण से कम से एक घंटे पहले, कोरी में एक छेद तेजस्वी और धीरे ठीक चिमटी की एक जोड़ी का उपयोग कर के अलावा chorion खींच द्वारा भ्रूण dechorionate । 28 डिग्री सेल्सियस इनक्यूबेटर में लौटने से पहले पेट्री डिश से कोई भी मलबा निकालें।
2. टच-पैदा की प्रतिक्रिया परख का प्रदर्शन
   1. परीक्षण शुरू करने से पहले कम से कम 15 मिनट तक 28 डिग्री सेल्सियस तक गर्मी का चरण।
      नोट:यह चरण तापमान नियंत्रित है और परीक्षण की अवधि के लिए 28 डिग्री सेल्सियस पर रहेगा। तापमान गतिविधि को प्रभावित करेगा और इसलिए निरंतर तापमान बनाए रखना महत्वपूर्ण है। यदि एक गर्म चरण उपलब्ध नहीं है तो पानी के तापमान पर नजर रखी जानी चाहिए और सभी प्रयोगों को एक ही तापमान पर आयोजित किया जाना चाहिए।
   2. एक प्रबुद्ध मंच पर भ्रूण माध्यम (5 mM NaCl, 0.17m KCl, 0.33 m CaCl_2,0.33 mM MgSO₄₎ से भरा एक पेट्री डिश रखें और पेट्री डिश के ऊपर उच्च गति कैमरा माउंट।
   3. वीडियो कैमरा रिकॉर्डिंग सॉफ्टवेयर (जैसे स्ट्रीम पिक्स 5, यहां वर्णित) और "वर्कस्पेस" टैब के तहत कैप्चर स्पीड (1,000 एफपीएस) के रूप में 1,000 फ्रेम प्रति सेकंड (1,000 एफपीएस) का चयन करें ताकि यह सुनिश्चित किया जा सके कि मछली की तेज तैराकी कार्रवाई दर्ज की गई है।
   4. एक समय में एक भ्रूण के साथ काम करते हुए, भ्रूण को पेट्री डिश के बीच में जेब्राफिश के साथ दृश्य के क्षेत्र में स्पष्ट रूप से दिखाई दें।
      नोट:यदि भ्रूण दूर तैरती प्रयोग के शुरू होने से पहले यह एक और के साथ बदल देते हैं, के रूप में फिर से कब्जा और भ्रूण की स्थिति में यह उत्तेजना और दोहराया फट प्रतिक्रियाओं के लिए असंवेदनशील होता जा सकता है कुछ रोग मॉडल में मांसपेशियों की कमजोरी को बढ़ावा देने सकते हैं ।
   5. "रिकॉर्ड" बटन पर क्लिक करके रिकॉर्डिंग शुरू करें और, सिर के शीर्ष पर एक कुंद सुई के साथ धीरे से छूकर भ्रूण को मेकेनोसेंसरी उत्तेजना वितरित करें।
   6. भ्रूण को देखने के क्षेत्र से बाहर तैरा है या आराम करने के लिए लौट आया है के बाद रिकॉर्डिंग बंद करो ।
      नोट:यांत्रिक उत्तेजना के बाद फट एस्केप प्रतिक्रिया के पहले 0.2 सेकंड के भीतर त्वरण चोटियों। इसलिए, सुनिश्चित करें कि मछली रिकॉर्डिंग से बचने की प्रतिक्रिया के पहले 0.2 सेकंड के दौरान कम से कम देखने के क्षेत्र में है। सॉफ्टवेयर स्ट्रीम Pix 5 का उपयोग करके, डेटा स्वचालित रूप से वीडियो फ़ाइल .avi के रूप में सेव हो जाएगा। वैकल्पिक वीडियो कैप्चर सॉफ्टवेयर जैसे फ्री वीडियो कैप्चर या सॉफ्टोनिक, दोनों डाउनलोड के लिए स्वतंत्र रूप से उपलब्ध हैं, इसका भी उपयोग किया जा सकता है।
   7. भ्रूण को एक नई पेट्री डिश में लौटा दें और जांच के लिए दूसरे भ्रूण का चयन करें। कम से कम 15 मछलियों पर परीक्षण करें।

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
90 mm Petri Dishes	Pacific Laboratory Products	PT S90001
Tweezers, style 8	ProSciTech	T04-821
Incubator	Thermoline Scientific	TEI-43L
High Speed Camera	Baumer	HXC20
StreamPix5	NorPix		Step 1.2.3
Temperature Control Unit	Viewpoint
http://www.randomization.com	N/A		Steps 1.1.2