Kaçış Yanıtı Tahlili: Zebra Balığı Larvalarının Uyaranlara DokunmaYa Tepkisini İncelemek İçin Bir Yöntem

Overview

Bu video, zebra balığı larvalarının uyaranlara dokunma tepkisini ölçen dokunma çağrıştıran yanıt testini açıklar.

Protocol

1. Dokunmatik Uyarılmış Yanıt Tahlili

1. Dokunmatik Uyarılmış Yanıt Tahlili için 2 dpf Embriyo Hazırlanması
   1. Aktivite gün boyunca önemli ölçüde değişebileceğinden, testin yapıldığı saatin deneyler arasında tutarlı olduğundan emin olun.
      NOT: Deney kör olarak yapılmalı ve deneysel eserleri en aza indirmek için randomize test sırası yapılmalıdır.
   2. Balık suşlarına, deneyi gerçekleştiren kişi tarafından bilinmeyen bir sayı atayın. Bunu takiben, serbestçe kullanılabilen çevrimiçi araçları kullanmak, test sırasını belirleyen rastgele bir liste oluşturur.
   3. Testten en az bir saat önce, korodaki bir deliği yırtarak ve bir çift ince cımbız kullanarak chorion'u hafifçe ayırarak embriyoları arındırın. 28 °C inkübatöre dönmeden önce petri kabındaki kalıntıları çıkarın.
2. Dokunmatik Uyarılmış Yanıt Tahlili Gerçekleştirme
   1. Teste başlamadan en az 15 dakika önce 28 °C'ye kadar ısıtma aşaması.
      NOT: Bu aşama sıcaklık kontrollüdür ve test süresince 28 °C'de kalacaktır. Sıcaklık aktiviteyi etkileyecektir ve bu nedenle sabit bir sıcaklığı korumak önemlidir. Isıtmalı bir aşama mevcut değilse, suyun sıcaklığı izlenmeli ve tüm deneyler aynı sıcaklıkta yapılmalıdır.
   2. Embriyo ortamı (5 mM NaCl, 0,17mM KCl, 0,33 mM CaCl₂, 0,33 mM MgSO₄₎ ile dolu bir petri kabını aydınlatılmış bir sahneye yerleştirin ve yüksek hızlı kamerayı petri kabının üzerine monte edin.
   3. Video kamera kayıt yazılımını başlatın (burada açıklanan Stream Pix 5 gibi) ve "çalışma alanı" sekmesinin altında, balığın hızlı yüzme eyleminin kaydedilmesini sağlamak için yakalama hızı olarak saniyede 1.000 kare (1.000 fps) seçin.
   4. Her seferinde bir embriyo ile çalışarak, embriyoyu petri kabının ortasına zebra balığı görüş alanında açıkça görülebilecek şekilde yerleştirin.
      NOT: Embriyo, deney başlamadan önce yüzerek uzaklaşırsa, embriyonun yeniden yakalanması ve konumlandırılması uyarana karşı duyarsızlaşmasına neden olabileceğinden ve tekrarlanan patlama yanıtları bazı hastalık modellerinde kas zayıflığını teşvik edebileceğinden.
   5. "Kayıt" düğmesine tıklayarak kayda başlayın ve kafanın üstünde kör bir iğne ile hafifçe dokunarak büyüleyici uyaranı embriyoya teslim edin.
   6. Embriyo görüş alanının dışına çıktıktan veya dinlenmeye döndükten sonra kaydı durdurun.
      NOT: Hızlanma, mekanik uyaranı takiben patlama kaçış yanıtının ilk 0,2 saniye içinde zirveler. Bu nedenle, en azından kaçış tepkisinin ilk 0,2 sn'sinde balığın görüş alanında olduğundan emin olun. Stream Pix 5 yazılımını kullanarak, veriler otomatik olarak .avi bir video dosyası olarak kaydedilir. Her ikisi de serbestçe indirilebilen Ücretsiz Video Yakalama veya Softonic gibi alternatif video yakalama yazılımları da kullanılabilir.
   7. Embriyoyu yeni bir petri kabına geri verin ve test için başka bir embriyo seçin. En az 15 balık üzerinde test gerçekleştirin.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
90 mm Petri Dishes	Pacific Laboratory Products	PT S90001
Tweezers, style 8	ProSciTech	T04-821
Incubator	Thermoline Scientific	TEI-43L
High Speed Camera	Baumer	HXC20
StreamPix5	NorPix		Step 1.2.3
Temperature Control Unit	Viewpoint
http://www.randomization.com	N/A		Steps 1.1.2