Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Encyclopedia of Experiments

في فيفو الكهرومporation: طريقة خاصة بالموقع لسمك الحمار الوحشي العابر

Overview

يصف هذا الفيديو في التصوير الكهربائي في الجسم الحي ، وهو تقنية لتوصيل الحمض النووي إلى خلايا ependymoglial في سمك الحمار الوحشي البالغ.

Protocol

1. الكهرومporation

  1. إزالة الأسماك من إعداد الحقن في حين لا يزال عقد في الاسفنج.
  2. تزج الجانب الداخلي من غيض من الأقطاب الكهربائية في هلام الموجات فوق الصوتية.
  3. تغطية telencephalon الأسماك مع كمية صغيرة من هلام الموجات فوق الصوتية.
  4. وضع رأس السمك بين الأقطاب الكهربائية، ووضع القطب إيجابية في الجانب البطني من رأس السمكة والقطب السلبي على الجانب الظهري(الشكل 1C)،في حين لا يزال عقد جسم السمك في الاسفنج. هذا يحدد اتجاه تدفق التيار اللازمة لependymoglia electroporate المتمركزة في منطقة تحت البطين.
  5. اضغط على الأقطاب الكهربائية بلطف ودقة ضد telencephalon (الشكل 1 C). إدارة التيار مع دواسة القدم. عقد الأقطاب الكهربائية في مكان حتى يتم الانتهاء من جميع البقول الخمسة.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Figure 1
الشكل 1: التمثيل التخطيطي للقسم التاجي من telencephalon حمار وحشي everted. (أ)مخطط لقسم تاجي من telencephalon حمار وحشي، وتسليط الضوء على موقف الخلايا ependymoglial، والتي بطانة سطح البطين وبناء جدار البطينين. الطبقة الظهرية ependymal هو سد نصفي الكرة الأرضية وتغطي البطين (الخامس) ، وتقع بين طبقتين الخلية : ependymoglial وependymal. (ب)على اليسار، صورة لرأس حمار وحشي مأخوذة من فوق، وتسليط الضوء على موقف telencephalon مع خط أبيض متقطعة. يصور الشعرية الزجاجية باللون الأحمر، جنبا إلى جنب مع الموقع المستهدف للإدخال الشعري. في الصورة على اليمين هو تخطيطي من الدماغ حمار وحشي يظهر موقف حقن البلازميد باللون الأحمر. وتجدر الإشارة إلى أن الشعرية الزجاجية لا تلمس telencephalon وأن يتم حقن البلازميد فقط فوق telencephalon في البطين. T = telencephalon، OT = استئصال البصري. (ج)يصور على اليسار صورة لرأس حمار وحشي (عرض الجانب)، وعلى اليمين هو تصوير الرأس (عرض الجانب) تظهر موقف الأقطاب الكهربائية من أجل استهداف telencephalon.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Ultrasound gel SignaGel, Parker laboratories INC 15-60 Electrode Gel
BTX Tweezertrodes Electrodes Platinum Tweezertrode, BTX Harvard Apparatus 45-0486 1mm diameter
Electroporation device BTX ECM830 Square Wave Electroporation System, BTX Harvard Apparatus 45-0662

DOWNLOAD MATERIALS LIST

Tags

قيمة فارغة، مشكلة ،
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter