Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Encyclopedia of Experiments

In Vivo Elektroporasyon: Zebra Balıklarını Transfect etmek için Bölgeye Özgü Bir Yöntem

Overview

Bu videoda, yetişkin zebra balıklarındaki ependymoglial hücrelere DNA iletimi için bir teknik olan in vivo elektroporasyon açıklanmaktadır.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

1. Elektroporasyon

  1. Balıkları süngerde tutarken enjeksiyon kurulumundan çıkarın.
  2. Elektrotların ucunun iç tarafını ultrason jeline batırın.
  3. Balık teleensefalonunun üzerini az miktarda ultrason jeli ile örtün.
  4. Balık kafasını elektrotlar arasında konumlandırın, pozitif elektrodu balığın başının ventral tarafına ve negatif elektrodu sırt tarafına yerleştirin (Şekil 1C), balığın vücudunu süngerde tutmaya devam ederken. Bu, subventriküler bölgeye yerleştirilmiş ependymoglia'yı elektroporatlamak için gerekli akımın akışının yönünü belirler.
  5. Elektrotları teleensefalona hafifçe ve hassas bir şekilde bastırın (Şekil 1 C). Ayak pedalı ile akımı yönetin. Beş darbe de bitene kadar elektrotları yerinde tutun.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Figure 1
Şekil 1: Everted zebra balığı teleensefalonun koronal bölümünün şematik gösterimi. (A) Zebra balığı teleensefalonun koronal bölümünün şeması, ventrikül yüzeyini kaplayan ve ventral ventrikül duvarını inşa eden ependymoglial hücrelerin konumunu vurgular. Dorsal ependymal tabaka iki yarımküreyi köprülüyor ve iki hücre katmanı arasında bulunan ventrikülü (V) kaplar: ependymoglial ve ependymal. (B) Solda, zebra balığı kafasının yukarıdan çekilmiş bir fotoğrafı, teleensefalonun konumunu beyaz kesikli bir çizgi ile vurgular. Kılcal damar yerleştirilmesi için hedef bölge ile birlikte kırmızı bir cam kılcal damar tasvir edilir. Sağda, plazmid enjeksiyonunun kırmızı konumunu gösteren zebra balığı beyninin şeması vardır. Cam kılcal damarların teleensefalona dokunmadığı ve plazmidin teleensefalonun hemen üstüne ventrikül içine enjekte edildiği belirtilmelidir. T = teleensefalon, OT = optik tectum. (C) Solda zebra balığı kafasının bir fotoğrafı (yan görünüm) ve sağda teleensefaloyu hedeflemek için elektrotların konumunu gösteren başın (yan görünüm) bir tasviri vardır.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Ultrasound gel SignaGel, Parker laboratories INC 15-60 Electrode Gel
BTX Tweezertrodes Electrodes Platinum Tweezertrode, BTX Harvard Apparatus 45-0486 1mm diameter
Electroporation device BTX ECM830 Square Wave Electroporation System, BTX Harvard Apparatus 45-0662

DOWNLOAD MATERIALS LIST

View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter