Overview
Bu videoda, yetişkin zebra balıklarındaki ependymoglial hücrelere DNA iletimi için bir teknik olan in vivo elektroporasyon açıklanmaktadır.
Protocol
1. Elektroporasyon
- Balıkları süngerde tutarken enjeksiyon kurulumundan çıkarın.
- Elektrotların ucunun iç tarafını ultrason jeline batırın.
- Balık teleensefalonunun üzerini az miktarda ultrason jeli ile örtün.
- Balık kafasını elektrotlar arasında konumlandırın, pozitif elektrodu balığın başının ventral tarafına ve negatif elektrodu sırt tarafına yerleştirin (Şekil 1C), balığın vücudunu süngerde tutmaya devam ederken. Bu, subventriküler bölgeye yerleştirilmiş ependymoglia'yı elektroporatlamak için gerekli akımın akışının yönünü belirler.
- Elektrotları teleensefalona hafifçe ve hassas bir şekilde bastırın (Şekil 1 C). Ayak pedalı ile akımı yönetin. Beş darbe de bitene kadar elektrotları yerinde tutun.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Şekil 1: Everted zebra balığı teleensefalonun koronal bölümünün şematik gösterimi. (A) Zebra balığı teleensefalonun koronal bölümünün şeması, ventrikül yüzeyini kaplayan ve ventral ventrikül duvarını inşa eden ependymoglial hücrelerin konumunu vurgular. Dorsal ependymal tabaka iki yarımküreyi köprülüyor ve iki hücre katmanı arasında bulunan ventrikülü (V) kaplar: ependymoglial ve ependymal. (B) Solda, zebra balığı kafasının yukarıdan çekilmiş bir fotoğrafı, teleensefalonun konumunu beyaz kesikli bir çizgi ile vurgular. Kılcal damar yerleştirilmesi için hedef bölge ile birlikte kırmızı bir cam kılcal damar tasvir edilir. Sağda, plazmid enjeksiyonunun kırmızı konumunu gösteren zebra balığı beyninin şeması vardır. Cam kılcal damarların teleensefalona dokunmadığı ve plazmidin teleensefalonun hemen üstüne ventrikül içine enjekte edildiği belirtilmelidir. T = teleensefalon, OT = optik tectum. (C) Solda zebra balığı kafasının bir fotoğrafı (yan görünüm) ve sağda teleensefaloyu hedeflemek için elektrotların konumunu gösteren başın (yan görünüm) bir tasviri vardır.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Ultrasound gel | SignaGel, Parker laboratories INC | 15-60 | Electrode Gel |
| BTX Tweezertrodes Electrodes | Platinum Tweezertrode, BTX Harvard Apparatus | 45-0486 | 1mm diameter |
| Electroporation device | BTX ECM830 Square Wave Electroporation System, BTX Harvard Apparatus | 45-0662 |
