In Vivo Elektroporatie: een sitespecifieke methode om zebravissen te transfecteren

Overview

Deze video beschrijft in vivo elektroporatie, een techniek voor DNA-afgifte in ependymogliale cellen bij volwassen zebravissen.

Protocol

1. Elektroporatie

1. Verwijder de vis uit de injectieopstelling terwijl u deze nog steeds in de spons houdt.
2. Dompel de binnenkant van de punt van de elektroden onder in de ultrasone gel.
3. Bedek de vis telencephalon met een kleine hoeveelheid ultrasone gel.
4. Plaats de viskop tussen de elektroden, plaats de positieve elektrode aan de ventrale kant van de kop van de vis en de negatieve elektrode aan de dorsale kant(figuur 1C),terwijl u het lichaam van de vis nog steeds in de spons houdt. Hiermee bepaalt u de richting van de stroomstroom die nodig is om ependymoglia te elektropotreren die zich in de subventriculaire zone bevindt.
5. Druk de elektroden voorzichtig en nauwkeurig tegen het telencephalon (figuur 1 C). Dien de stroom toe met het voetpedaal. Houd de elektroden op hun plaats totdat alle vijf de pulsen klaar zijn.

Representative Results

Figuur 1: Schematische weergave van coronale sectie van de everted zebravis telencephalon. (A) Schema van een coronale sectie van zebravis telencephalon, met de nadruk op de positie van ependymogliale cellen, die het ventriculaire oppervlak bekleden en de ventrale ventriculaire wand bouwen. Dorsale ependymale laag overbrugt de twee hemisferen en bedekt de ventrikel (V), gelegen tussen twee cellagen: ependymoglial en ependymal. (B) Links een foto van de zebraviskop van bovenaf genomen, die de positie van telencephalon met een witte stippellijn benadrukt. Een glazen capillair is afgebeeld in rood, samen met de doelplaats voor capillaire insertie. Afgebeeld aan de rechterkant is een schema van zebravis hersenen toont de positie van plasmide injectie in het rood. Opgemerkt moet worden dat het glazen capillair het telencephalon niet raakt en dat het plasmide net boven het telencephalon in de ventrikel wordt geïnjecteerd. T = telencephalon, OT = optisch tectum. (C) Links is een foto van de zebraviskop afgebeeld (zijaanzicht), en rechts een afbeelding van het hoofd (zijaanzicht) met de positie van elektroden om het telencephalon te richten.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Ultrasound gel	SignaGel, Parker laboratories INC	15-60	Electrode Gel
BTX Tweezertrodes Electrodes	Platinum Tweezertrode, BTX Harvard Apparatus	45-0486	1mm diameter
Electroporation device	BTX ECM830 Square Wave Electroporation System, BTX Harvard Apparatus	45-0662