In Vivo Elektroporation: Eine standortspezifische Methode zur Transfektion von Zebrafischen

Overview

Dieses Video beschreibt die In-vivo-Elektroporation, eine Technik zur DNA-Abgabe in ependymogliaale Zellen bei erwachsenen Zebrafischen.

Protocol

1. Elektroporation

1. Entfernen Sie den Fisch aus dem Injektionssetup, während Sie ihn noch im Schwamm halten.
2. Tauchen Sie die Innenseite der Spitze der Elektroden in das Ultraschallgel ein.
3. Bedecken Sie den Fisch Telencephalon mit einer kleinen Menge Ultraschallgel.
4. Positionieren Sie den Fischkopf zwischen den Elektroden, platzieren Sie die positive Elektrode an der ventralen Seite des Fischkopfes und die negative Elektrode auf der dorsalen Seite(Abbildung 1C), während Sie den Körper des Fisches noch im Schwamm halten. Dadurch wird die Strömungsrichtung des Stroms festgelegt, der erforderlich ist, um Ependymoglia in der subventrikulären Zone zu elektroporatieren.
5. Drücken Sie die Elektroden vorsichtig und präzise gegen das Telencephalon (Abbildung 1 C). Den Strom mit dem Fußpedal abstellen. Halten Sie die Elektroden an Ort und Stelle, bis alle fünf Impulse fertig sind.

Representative Results

Abbildung 1: Schematische Darstellung des koronalen Abschnitts des everted Zebrafischtelencephalons. (A) Schema eines koronalen Abschnitts von Zebrafischtelencephalon, Hervorhebung der Position von ependymoglialen Zellen, die ventrikuläre Oberfläche auskleidung und die ventrale ventrikuläre Wand bilden. Dorsale ependymale Schicht überbrückt die beiden Hemisphären und bedeckt die Herzkammer (V), die sich zwischen zwei Zellschichten befindet: ependymogliale und ependymale. (B) Auf der linken Seite ein Foto des Zebrafischkopfes von oben aufgenommen, hervorhebt die Position von Telencephalon mit einer weißen gestrichelten Linie. Eine Glaskapillare ist rot dargestellt, zusammen mit der Zielstelle für das Einstecken von Kapillaren. Auf der rechten Seite ist ein Schaltplan des Zebrafischgehirns abgebildet, das die Position der Plasmidinjektion in Rot zeigt. Es sei darauf hingewiesen, dass die Glaskapillare das Telencephalon nicht berührt und dass das Plasmid knapp über dem Telencephalon in die Herzkammer injiziert wird. T = Telencephalon, OT = optisches Tectum. (C) Auf der linken Seite ist ein Foto des Zebrafischkopfes (Seitenansicht) abgebildet, und auf der rechten Seite ist eine Darstellung des Kopfes (Seitenansicht) dargestellt, die die Position der Elektroden zeigt, um das Telencephalon anzugreifen.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Ultrasound gel	SignaGel, Parker laboratories INC	15-60	Electrode Gel
BTX Tweezertrodes Electrodes	Platinum Tweezertrode, BTX Harvard Apparatus	45-0486	1mm diameter
Electroporation device	BTX ECM830 Square Wave Electroporation System, BTX Harvard Apparatus	45-0662