Overview
यह वीडियो वीवो इलेक्ट्रोपॉरेशन में वर्णन करता है, जो वयस्क जेब्राफिश में एपेंडीमोग्लियाल कोशिकाओं में डीएनए डिलीवरी की एक तकनीक है ।
Protocol
1. इलेक्ट्रोपाउशन
- अभी भी स्पंज में पकड़ करते हुए इंजेक्शन सेट-अप से मछली निकालें।
- अल्ट्रासाउंड जेल में इलेक्ट्रोड की नोक के भीतरी हिस्से को विसर्जित करें।
- मछली टेलेंसेफेलन को थोड़ी मात्रा में अल्ट्रासाउंड जेल से ढक दें।
- इलेक्ट्रोड के बीच मछली के सिर की स्थिति, मछली के सिर के वेंट्रल साइड में सकारात्मक इलेक्ट्रोड और पृष्ठीय पक्ष(चित्रा 1C)पर नकारात्मक इलेक्ट्रोड रखने, जबकि अभी भी स्पंज में मछली के शरीर को पकड़े हुए । यह सबवेंट्रिकुलर जोन में तैनात एपेंडीमोग्लिया को इलेक्ट्रोपॉरेट करने के लिए आवश्यक वर्तमान के प्रवाह की दिशा निर्धारित करता है।
- इलेक्ट्रोड को धीरे-धीरे और ठीक टेलेंसेफेलन(चित्रा 1 सी) के खिलाफ दबाएं। पैर पेडल के साथ वर्तमान प्रशासन। इलेक्ट्रोड को तब तक रखें जब तक कि सभी पांच दालें समाप्त न हो जाएं।
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Representative Results
चित्रा 1: एवरटेड जेब्राफिश टेलेंसेफलन के कोरोनल सेक्शन का योजनाबद्ध प्रतिनिधित्व। (क)जेब्राफिश टेलेंसेफलन के कोरोनल सेक्शन की योजना, जिसमें एपेंडीमोग्लियाल कोशिकाओं की स्थिति को रेखांकित किया गया है, जो वेंट्रिकुलर सतह को अस्तर कर रहे हैं और वेंट्रल वेंट्रिकुलर दीवार का निर्माण कर रहे हैं । पृष्ठीय एपेंडीमल परत दो गोलार्द्धों को पाट रही है और दो कोशिका परतों के बीच स्थित वेंट्रिकल (वी) को कवर कर रही है: एपेंडीमोग्लियल और एपेंडिमल। (ख)बाईं ओर, ऊपर से ली गई जेब्राफिश हेड की तस्वीर, जिसमें सफेद धराशायी रेखा के साथ टेलेंसेफलॉन की स्थिति को रेखांकित किया गया है । एक ग्लास केशिका लाल रंग में चित्रित किया गया है, साथ ही केशिका प्रविष्टि के लिए लक्ष्य स्थल के साथ। दाईं ओर चित्र जेब्राफिश मस्तिष्क की एक योजनाबद्ध लाल रंग में प्लाज्मिड इंजेक्शन की स्थिति दिखा रहा है । यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि ग्लास केशिका टेलेंसेफेलन को नहीं छूती है और प्लाज्मिड को टेलेंसेफेलन के ठीक ऊपर वेंट्रिकल में इंजेक्ट किया जाता है। टी = टेलेंसेफलन, ओटी = ऑप्टिक टेक्टम। (ग)बाईं ओर चित्रित जेब्राफिश सिर (साइड व्यू) की एक तस्वीर है, और दाईं ओर सिर (साइड व्यू) का चित्रण है जो टेलेंसेफलन को लक्षित करने के लिए इलेक्ट्रोड की स्थिति दिखाता है।
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Ultrasound gel | SignaGel, Parker laboratories INC | 15-60 | Electrode Gel |
| BTX Tweezertrodes Electrodes | Platinum Tweezertrode, BTX Harvard Apparatus | 45-0486 | 1mm diameter |
| Electroporation device | BTX ECM830 Square Wave Electroporation System, BTX Harvard Apparatus | 45-0662 |
