En Vivo Electroporación: un método específico del sitio para transfectar el pez cebra

Overview

Este video describe la electroporación in vivo, que es una técnica para la entrega de ADN en células ependymogliales en peces cebra adultos.

Protocol

1. Electroporación

1. Retire el pescado de la configuración de inyección mientras todavía lo sostiene en la esponja.
2. Sumerja el lado interno de la punta de los electrodos en el gel de ultrasonido.
3. Cubra el telencéfalo de pescado con una pequeña cantidad de gel de ultrasonido.
4. Coloque la cabeza de pez entre los electrodos, colocando el electrodo positivo en el lado ventral de la cabeza del pez y el electrodo negativo en el lado dorsal(Figura 1C),mientras mantiene el cuerpo del pez en la esponja. Esto establece la dirección del flujo de la corriente necesaria para electroporar ependymoglia situada en zona subventricular.
5. Pulse los electrodos con cuidado y precisión contra el telencéfalo (Figura 1 C). Administrar la corriente con el pedal. Sujete los electrodos en su lugar hasta que terminen los cinco pulsos.

Representative Results

Figura 1: Representación esquemática de la sección coronal del telencéfalo de pez cebra. (A) Esquema de una sección coronal de telencéfalo de pez cebra, destacando la posición de las células ependymogliales, que recubren la superficie ventricular y construyen la pared ventricular ventral. La capa ependímica dorsal está puenteando los dos hemisferios y cubriendo el ventrículo (V), situado entre dos capas celulares: ependymoglial y ependímica. BA la izquierda, una fotografía de la cabeza del pez cebra tomada desde arriba, destacando la posición de telencéfalo con una línea blanca discontinua. Un capilar de vidrio se representa en rojo, junto con el sitio objetivo para la inserción capilar. En la imagen de la derecha hay un esquema de cerebro de pez cebra que muestra la posición de la inyección de plásmidos en rojo. Cabe señalar que el capilar de vidrio no toca el telencéfalo y que el plásmido se inyecta justo por encima del telencéfalo en el ventrículo. T = telencéfalo, OT = tectum óptico. (C) Representada a la izquierda hay una fotografía de la cabeza del pez cebra (vista lateral), y a la derecha hay una representación de la cabeza (vista lateral) que muestra la posición de los electrodos con el fin de dirigirse al telencéfalo.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Ultrasound gel	SignaGel, Parker laboratories INC	15-60	Electrode Gel
BTX Tweezertrodes Electrodes	Platinum Tweezertrode, BTX Harvard Apparatus	45-0486	1mm diameter
Electroporation device	BTX ECM830 Square Wave Electroporation System, BTX Harvard Apparatus	45-0662